所有參賽者須為堅持長跑鍛鍊，身體健康，適宜參加該項比賽，報名資格分別如下：
1.參賽院校，須為非專業體育院校的普通高等學校或商學院。
2.參賽選手，須為普通高等學校在讀或已畢業的學生（全日制學生）、在讀或畢業商學院學生（僅限MBA和EMBA）。所有人員須有所代表高校的學生證或畢業證或商學院錄用證明原件（學校教工證、學校工作證等不得作為高校運動員參賽資格），必要時需出示證明。凡在中國田協註冊過的專業/職業運動員、凡各普通高校根據教育部有關規定錄取的高水平運動隊隊員均不得參加本賽事。
3.全部由同一所普通高等學校的在校生或畢業生組成的隊伍歸為高校代表隊。
4.全部由同一所商學院的在校生或畢業生組成的隊伍歸為商學院代表隊。
5.由多個學校在校學生或畢業生組成的隊伍歸為高校聯隊。
6.組委會邀請的團隊歸為特邀團隊。
7.高校聯隊和特邀團隊，只給予成績，不參與團隊排名和獎勵，但參與個人排名。
8.每支隊伍報名人數包括10名主力+不超過6名替補，除A隊第一棒（A1棒）必須為女生，其他棒次性別不限，所有運動員必須滿足2001年12月31日前出生。
9.各個分站比賽高校代表隊前四名和商學院代表隊前四名隊伍獲得參加總決賽的資格，總決賽中高校代表隊和商學院代表隊分別排名，且商學院不參與獎勵。
10.取得參加總決賽的隊伍在總決賽前可以重新按照條件選擇不超過16人組隊，組委會承擔高校代表隊參加總決賽隊伍從所在城市往返總決賽城市的差旅費用、總決賽期間的食宿費；商學院代表隊參加總決賽隊伍的一切費用自理。
11.取得參加總決賽資格的隊伍在總決賽前可以重新按照條件選擇不超過16人組隊，其中高校代表隊參加總決賽的人員中，第一棒（A1女、B1）、第五棒（A5、B5）在本年度1月1日時年齡必須滿足不超過30周歲。
12.以上各項參賽資格證明材料，組委會將在本著相互誠信的原則具體由各團隊領隊進行資料審核並收集證件原件照片自查自報，組委會將在賽事期間及賽後兩周內隨機抽查、接到舉報徹查，一旦有確鑿證據發現違規者，將取消該隊本次成績、取消該團隊下一年度參賽資格、取消該團隊內全體參賽名單中全部人員下一年度參賽資格，發放獎勵將全部收回，並在賽事網站上進行違規公示。
13.以下疾病患者不宜參加長距離接力挑戰賽：先天性心臟病和風溼性心臟病患者/高血壓和腦血管疾病患者/心肌炎和其它心臟病患者/冠狀動脈病患者和嚴重心率不齊者/糖尿病患者/孕婦/其他不適合運動的疾病患者。