製作微生物培養基是實驗人員必備的基礎操作之一，那麼，你製作的培養合格嗎？在培養基製作的過程中應該注意哪些事項呢？這些經驗總結不能錯過。
培養基是供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養物質組合配製而成的營養基質。
一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質，也是細胞生長和繁殖的生存環境。
培養基種類很多，根據配製原料的來源可分為自然培養基、合成培養基、半合成培養基；根據物理狀態可分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基；根據培養功能可分為基礎培養基、選擇培養基、加富培養基、鑑別培養基等；根據使用範圍可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基、真菌培養基等。
培養基配成後一般需測試並調節pH，還須進行滅菌，通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養基由於富含營養物質，易被汙染或變質。配好後不宜久置，最好現配現用。
以下是一些實驗室在製作培養基時候的經驗總結 ：
1、培養基配方選擇
同一種培養基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此，除所用的是標準方法，應嚴格按其規定進行配製外，一般均應儘量收集有關資料，加以比較核對，再依據自己的使用目的，加以選用，記錄其來源。
2、培養基製備記錄
每次製備培養基均應有記錄，包括培養基名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號，最終pH值、消毒的溫度和時間製備的日期和製備者等，記錄應複製一份，原記錄保存備查，複製記錄隨制好的培養基一同存放、以防發生混亂。
3、培養基成份稱量
培養基的各種成分必須精確稱取並要注意防止錯亂，最好一次完成，不要中斷。可將配方置於傍側，每稱完一種成分即在配方上做出記號，並將所需稱取的藥品一次取齊，置於左側，每種稱取完畢後，即移放於右側。完全稱取完畢後，還應進行一次檢查。
4、培養基成份的混合與溶化
培養基所用化學藥品均應是化學純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養基中，使細菌不易生長。最好使用不鏽鋼加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置於高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。
5、培養基pH值的調正
pH因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化，培養基各成分完全溶解後，應進行pH的初步調正。例如，牛肉浸液約可降低pH0.2，而腸浸液pH卻會有顯著的升高。因此，對這個步驟，操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的最終pH，保證培養基的質量。pH調整後，還應將培養基煮沸數分鐘，以利培養基沉澱物的析出。
6、培養基過濾澄清
液體培養基必須絕對澄清，瓊脂培養基也應透明無顯著沉澱，因此，須要採用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養基可用濾紙過濾法，濾紙應摺疊成摺扇或漏鬥形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。
瓊脂培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反覆過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。
即將冷卻至55～60℃的培養基放入大的三角燒瓶內，裝入量不得超過燒瓶容量的1/2，每1000ml培養基加入1～2個雞蛋的蛋白，強力振搖3～5分鐘，置於高壓蒸汽滅菌器中、121℃加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過濾即可。
7、培養基分裝
培養基的分裝，應按使用的目的和要求，分裝於試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防溼紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包紮(現試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時最好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養基時，分裝量應以能形成2/3底層和1/3斜面的量為恰當。
分裝容器應預先清洗乾淨並經幹烤消毒，以利於培養基的徹底滅菌。每批培養基應另外分裝20ml培養基於一小玻璃瓶中，隨該批培養基同時滅菌，以為測定該批培養基最終pH之用。
8、培養基滅菌
一般培養基可採用121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養基製備方法中，如無特殊規定，即可用此法滅菌。
某些畏熱成分，如糖類，應另行配成20%或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消毒，以後再用無菌操作技術、定量加於培養基。明膠培養基亦應用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應以無菌操作技術抽取和加入於經冷卻約50℃左右的培養基中。
瓊脂斜面培養基應在滅菌後立即取出，冷至55-60℃時，擺成適當斜面，待其自然凝固。
9、培養基質量測試
每批培養基製備好以後，應仔細檢查一遍，如發現破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染等、均應挑出棄去。並測定其最終pH。將全部培養基放入36±1℃恆溫箱培養過夜，如發現有菌生長，即棄去。用有關的標準菌株接種1～2管或瓶培養基，培養24～48小時，如無菌生長或生長不好。應追查原因並重複接種一次，如結果仍同前，則該批培養基即應棄去，不能使用。
（1）澄清度
水是細胞培養基的溶劑。細胞培養基中的營養成分只有完全溶解於水才能被細胞吸收攝取，細胞才能生長增殖，因此細胞培養基是否溶解以及培養液是否透明澄清直接影響培養基使用。該項目是通過對水溶解後的細胞培養基的澄清度檢查，判斷細胞培養基的澄清度。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅨB進行。
（2）pH值
哺乳類動物細胞生長需要合適的酸鹼度，pH過高或者過低都會導致細胞死亡。pH值的測定也可以檢查細胞培養基的批間差。清大天一標準規定取規定量供試品，用注射用水（水溫20℃-30℃）溶解至1L，加入規定量碳酸氫鈉到上述溶液中，用與細胞培養基溶液pH值相近的兩點標準緩衝液校準後的酸度計進行測定。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅥH進行；加入規定量的碳酸氫鈉到上述溶液中，按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅥH進行。
（3）乾燥減量的質量分數
細胞培養基具有吸溼性，在空氣中放置水分會很快升高，乾燥減量的質量分數表示產品中含溼量。細胞培養基是有菌製劑，其豐富的營養成分有利於微生物生長，控制細胞培養基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持細胞培養基的養分。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅧL乾燥失重測定法進行。
（4）滲透壓
溶劑通過半透膜由低濃度向高濃度溶液擴散的現象稱為滲透，阻止滲透所需施加的壓力，稱為滲透壓。細胞必須生活在等滲環境中，動物細胞藉助K＋、Na＋維持滲透平衡。大多數細胞對滲透壓有一定的耐受性。但是培養液滲透壓過高容易使細胞脫水萎縮，培養液滲透壓過低容易使細胞膨脹破裂，因此要控制培養基的滲透壓範圍。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測定法進行。
（5）細菌內毒素
細菌內毒素是許多病原性細菌所產生的毒素。它的特殊性在於不是細菌或細菌的代謝產物，而是細菌死亡或解體後才釋放出來的一種具有生物活性的物質。培養基細菌內毒素過高，對生物製品疫苗（如狂犬、B肝疫苗）、基因工程藥品等注射用的藥品都需要檢查細菌內毒素。因此本項目的檢驗符合生物製品質量控制要求。
常規細胞培養基的細菌內毒素標準定為＜10EU/mL。稱取本品規定量（見表4-12）的1/100，加入細菌內毒素檢查用水10mL溶解，吸取該溶液0.1mL加細菌內毒素檢查用水3.9mL，混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅪE細菌內毒素檢查法中的凝膠法進行。
（6）微生物限度
細胞培養基不是無菌產品，其中的微生物在一定條件下會吸收細胞培養基中的營養物質滋生繁殖，導致細胞培養基變質失效。控制細胞培養基中細菌和黴菌，是延長細胞培養基有效期的方法之一。
參考《中華人民共和國藥典》2005版二部附錄第100頁的口服給藥製劑的微生物限度標準，並嚴於該標準，規定細胞培養基產品的細菌數每1g不得超過200個，黴菌數每1g不得超過50個。稱取樣品1g，加入無菌純化水10mL溶解，混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進行，檢查項目為細菌數、黴菌數。檢查法採用平皿法。
（7）細胞生長試驗
這是一個性能特性表述的要求。細胞培養基的功能就是培養哺乳類動物細胞，因此經過細胞培養效果的檢驗是產品質量優劣的直觀表述，這也是很多生物製藥用戶要求的一項指標。
目前國內尚無細胞培養和計數的法定方法，可參考《體外培養的原理與技術》中細胞計數法論述的內容給出。按產品說明書配製培養液進行細胞培養，前四天用含10%小牛血清的培養液培養，觀察細胞形態並計數，檢查細胞培養基是否有促生長的能力。後三天用不含小牛血清的培養液維持培養，觀察細胞形態並計數，檢查細胞培養基中是否有不利細胞生長的毒素。本試驗用細胞為VERO細胞。
10、培養基保存
培養基應存放於冷暗處，最好能放於普通冰箱內。放置時間不宜超過一周，傾注的平板培養基不宜超過3天。每批培養基均必須附有該批培養基製備記錄副頁或明顯標籤。
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