試題1：如圖是從土壤中篩選產脲酶細菌的過程。請回答
（1）圖中選擇培養基應以 為唯一氮源；鑑別培養基還需添加 作指示劑。
（2）在5個細菌培養基平板上，均接種稀釋倍數為105的土壤樣品溶液0.1mL，培養一段時間後，平板上長出的細菌菌落數分別為13、156、462、178和191。
該過程採取的接種方法是 ，每克土壤樣品中的細菌數量為 個。
解析：（1）脲酶能夠催化尿素分解為氨，因此要從土壤中篩選產脲酶的細菌，培養基應以尿素為唯一氮源；由於尿素被脲酶分解成氨，氨會使培養基的鹼性增強，pH升高，從而使酚紅指示劑變紅，因此鑑別培養基還需添加酚紅作指示劑。
（2）用於計數細菌菌落數的常用方法是稀釋塗布平板法，統計的菌落數應介於30～300之間，故選擇細菌菌落數為156、178和191的平板計數．每克該土壤樣品中的菌落數對應的應該是每毫升菌液中的細菌數目，所以每克該土壤樣品中的菌落數為（156+178+191）÷3÷0.1×105=1.75×108個。
答案：（1）尿素 酚紅 （2）稀釋塗布平板 1.75×108個
通過上述試題的菌落計數，發現計算怎麼會取後三個數據，捨去13這個數據？而浙科版教材中，明明提到每個培養皿最適宜的是20個以內？（如下所示）
那是因為浙科版教材說的20以內，目的是分離菌種，應該有個適當的培養，得到菌落。接下來，我們還需要把有一定量的菌種取下來，進行擴大培養或保藏。也就是說，菌落需要生長到一定的大小，如果數量太多，不能得到單菌落，意思是重疊（如下圖）。所以，菌落數控制在20以內，不能太多。
人教版教材中，塗布分離法統計的菌落個數應介於30～300之間（如下所示），指的是統計菌落數，目的不是分離菌落。意思是只要有菌落生長出來就可以計數，不需要菌落生長到一定的大小。
這個數量和浙科版必修3酵母菌的計數道理一樣（如下所示）。當然，酵母菌的計數用的是血細胞計數板。
關於酵母菌的計數可以看以下連結：關於酵母菌的計數若干問題解析
大家都知道劃線分離法是不能用來細菌計數的，因為只有劃線的後期才有可能是單菌落，通常用稀釋塗布分離法來計數，那麼「細菌進行計數只能採用塗布分離法」，為什麼是錯誤的呢？測定微生物生長的方法很多，各種方法均有其優缺點，也不是在任何情況下都適用。在微生物學工作中一般常用的是培養皿菌落計數法、計數器法和比濁法等。即用血細胞計數板進行計數。取一定體積的樣品細胞懸液置於血細胞計數板的計數室內，用顯微鏡觀察計數。由於計數室的容積是一定的（0.1mm3），因而根據計數板刻度內的細菌數，可計算樣品中的含菌數。本法不僅適於細菌計數，也適用於酵母菌及黴菌孢子計數。比濁法是根據菌懸液的透光量間接地測定細菌的數量。細菌懸浮液的濃度在一定範圍內與透光度成反比，與光密度成正比，所以，可用光電比色計測定菌液，用光密度（OD值）表示樣品菌液濃度。此法簡便快捷，但只能檢測含有大量細菌的懸浮液，得出相對的細菌數目，對顏色太深的樣品，不能用此法測定。常用的有平板菌落計數法，是根據每個活的細菌能長出一個菌落的原理設計的。取一定容量的菌懸液，作一系列的倍比稀釋，然後將定量的稀釋液進行平板培養，根據培養出的菌落數，可算出培養物中的活菌數。此法靈敏度高，是一種檢測汙染活菌數的方法，也是目前國際上許多國家所採用的方法。使用該法應注意：①一般選取菌落數在30～300之間的平板進行計數，過多或過少均不準確；②為了防止菌落蔓延，影響計數，可在培養基中加入0.001%2，3，5一氯化三苯基四氮唑（TTC）；③本法限用於形成菌落的微生物。廣泛應用於水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細菌檢驗，是最常用的活菌計數法。電子計數器的工作原理是測定小孔中液體的電阻變化，小孔僅能通過一個細胞，當一個細胞通過這個小孔時，電阻明顯增加，形成一個脈衝，自動記錄在電子記錄裝置上。該法測定結果較準確，但它只識別顆粒大小，而不能區分是否為細菌。因此，要求菌懸液中不含任何碎片。5．測定細胞重量法
此法分為溼重法和乾重法。溼重法系單位體積培養物經離心後將溼菌體進行稱重；乾重法系單位體積培養物經離心後，以清水洗淨放人乾燥器加熱烘乾，使之失去水分然後稱重。此法適於菌體濃度較高的樣品，是測定絲狀真菌生長量的一種常用方法。氮、碳是細胞的主要成分，含量較穩定，測定氮、碳的含量可以推知細胞的質量。此法適於細胞濃度較高的樣品。這種方法通常用於很小，用一般的比濁法無法計數的微生物，比如原核生物支原體等，因為支原體的液體培養物是完全透明的，呈現為清亮透明紅色，因此無法用比濁法來計數，由於支原體固體培養很困難，用菌落形成法也不容易計數，因此需要用特殊的計數方法，即CCU法。它是以微生物在培養基中的代謝活力為指標，來計數微生物的相對含量的，下面以解脲脲原體（人類泌尿生殖道常見的寄生菌）為例，簡單介紹其操作：（1）取12隻無菌試管，每一管裝1.8ml解脲脲原體培養基。（2）在第一管加入0.2ml待測解脲脲原體菌液，充分混勻，從中吸取0.2ml加入第二管，依次類推，10倍梯度稀釋，一直到最末一管。（3）於37℃培養，以培養基顏色改變的最末一管作為待測菌液的CCU，也就是支原體的最大代謝活力，比如，第六管出現顏色改變，他的相對濃度就是106CCU/ml。一般來說，比濁法和菌落計數法就可以滿足絕大多數細菌的計數，但是對支原體這樣比較特殊的微生物，用CCU法比較合適。