【技術】公豬精液稀釋處理規範化操作流程

　

①將一預溫後的燒杯或塑料杯放在電子秤上，打開電子秤，當顯示為零時， 將裝精液的食品袋從集精杯中取出放入杯中，顯示讀數為精液的重量。

②將放精液的燒杯輕輕搖勻精液後，放入 35℃的水浴鍋中與稀釋液等溫。

　　

③立即用取樣器取精液 10～25 微升左右，滴在載物臺上預熱的載玻片上， 蓋上蓋玻片，估測活力。精子活力大於 0.6，則可用於下一步的處理。

　

④另取 1 毫升精液放入加有 10 毫升生理鹽水的精子密度杯中， 讀出讀數後， 在查對表上查到精子密度值。

　　

⑤計算精液可分裝的份數和最終的精液體積或重量。

　　

⑥將大燒杯放在電子秤上，除皮，然後再將精液袋放入其中，並將精液袋 上口翻在杯沿外，將裝稀釋液的三角瓶從水浴鍋中取出，擦去底部水分，將稀釋液加入大燒杯中， 直到達到計算的最終重量，輕輕搖動或用玻璃棒攪拌精液使其混合。

　　

⑦精液稀釋後，檢查精液活力，若無明顯下降，開始分裝。

　　

⑧將精液按規定重量分裝於各個精液瓶(袋)中，排出空氣後封口，進行精液標記， 22℃-25℃的室溫 1 小時後(或用幾層毛巾包被好後)，降溫到 20℃左右時直接放置 17℃冰箱中。

　　

⑨清洗各種容器並放於消毒櫃中乾燥消毒。

　　

　

1. 配製過程

以 1000 毫升 BTS 稀釋液為例，可用以下任一方法：

　　

①經過清洗乾燥消毒的三角瓶，將一袋 BTS 稀釋粉(50 克)全部加入瓶中， 用量筒量取雙蒸餾水 1000 毫升，加入三角瓶中。蓋上蓋子或用稀釋粉袋套在三 角瓶口上，封緊搖動，使稀釋粉完全溶解。或放在磁力攪拌器上，攪拌加速溶解。取下蓋子，放入 35℃的水浴鍋中預溫。稀釋液用過後，三角瓶應用蒸餾水衝洗，空幹水分，然後將三角瓶、量筒用牛皮紙封口，放入 80～120℃的消毒櫃或乾燥箱中烘乾。

　　

②將兩個食品袋相套放入大燒杯中或塑料杯中，放在電子秤上，打開電子秤開關，當電子秤上讀數為零時， 將連接蒸餾水容器的矽膠管放出少量水後，將管口對準杯口注水，並注意讀 數變化，當接近 1000 克時，應放慢流速，改為滴注，直到 1000 克。之後，應將 蒸餾水管的龍頭套好，防止汙染。 在大燒杯中加入一袋稀釋粉(50 克)。 從盛磁珠的小燒杯中取鑷子並夾取磁珠， 在廢液缸上用洗瓶衝洗磁珠 2-3 次， 待磁珠上水分滴淨後，放入燒杯中，然後將燒杯放在磁力攪拌器上，打開電源開關和加熱開關, 調整磁珠轉速旋扭，使磁珠以適當速度旋轉 (水體形成渦流) ，使稀釋粉全部溶解後，降低磁珠轉速，關閉加熱和電源開關。將杯子放入35℃的水浴中預溫。

　　

[註：不能控溫的加熱磁力攪拌器使用時間不可超過 10 分鐘，或及早關閉加熱電源;平時磁珠放在一個清洗乾燥過的小燒杯中，注入新鮮蒸餾水半杯，鑷子為不鏽鋼材料，也經清洗乾燥放入杯中， 蓋上乾淨的培養皿，每3 周應換掉陳水，衝淨換上新的蒸餾水。稀釋液加入精液中後，應用小燒杯中的鑷子將磁珠從大燒杯中夾出，並在廢液缸上衝洗磁珠和鑷子前端 3-4 遍，待磁珠上水分滴淨後，連同鑷子放入小燒杯中，蓋上培養皿。]

　　

這種方法由於稀釋液是在一次性食品袋中配製的，因此，不需要對配製稀釋液的容器進行清洗和消毒，實現了稀釋液配製的免消毒。 冬季稀釋粉溶解較慢，可將稀釋粉與水混合後，放入水浴鍋中預溫 10 分鐘， 再搖勻，可加速稀釋粉溶解。使用加熱磁力攪拌器者不必在水浴鍋中預溫。

　　

[註：除大規模人工授精站外，一般不主張自己配製稀釋粉，推薦使用商業化稀釋粉，這些產品質量穩定可靠。另外，稀釋粉與蒸餾水按什麼比例混合是十分嚴格的，應按照說明書上的配比進行稀釋粉的溶解，不可改變配比。]

　　

2. PH 值與滲透壓

　　

用 1N 稀鹽酸或 1N 氫氧化鈉調整 BTS 稀釋液的 PH 值為 7.2(6.8-7.4)左右, 滲透壓為 330mOsm

　　

3. 稀釋液的保存

　　

液態狀稀釋液冰箱 4℃保存，不超過 24 小時，超過有效貯存期的變質稀釋液應廢棄

　

1. 精液稀釋的目的

　　

新採集的動物精液精子濃度高，而且溫度較高，精子的代謝強度大，很快就產生大量的代謝產物，並使其自身的生命耗盡。即使很短的時間內，都可能因精子的代謝產物對精子產生毒害， 而使精子保存時間縮短。而用合理的稀釋液稀釋精液，則可給精子提供營養，中和代謝產物，並且允許精液降溫，從而大大延長 精子的存活時間，並能保持精子的受精能力。所以，對人工授精來說，豬精液盡 快進行稀釋十分重要， 這也是為什麼要將實驗室建在採精室的隔壁的原因。 另外， 原精液的精子濃度大， 而一次輸精的總精子數僅幾十個億，只相當於幾毫升到十幾毫升的原精， 而母豬受精時需要的總精液量又不能低於 100 毫升，這也是必須 稀釋的另一個原因。因此，精液稀釋的目的是：

　　

(1)增加精液容量，以確保每頭母豬輸精的總精液量。

　　

(2)有利於精子的體外存活和受精能力的保持。

　　

豬精液的稀釋液配方有很多種，如在常溫下可保存 3～5 天的配方有 BTS， Kiev、Modena 等，保存 5～7 天的長效保存稀釋液有 ZorPVA。也有冷凍精液稀釋液。 最常用的稀釋液為 BTS 稀釋液。

　　

2. 每份精液的總精子數

　　

目前還沒有一個每頭份精液的最低精子數標準和體積標準，但一般認為一次輸入 15 億以上個精子， 對受胎率和產仔數是可靠的。但也沒有必要超過 60 億個精子。 在實際生產中，建議剛剛開展人工授精的豬場，每份精液應有 50～60 億個精子;如果人工授精人員技術已經熟練，可將每份精液總精子數降到 40 億。而個體人工授精站每份精液的總精子數應在 25～30 億。從精液的容量上講，初配母豬一次輸入精液量應為 100 毫升，經產母豬一次輸精的精液量為 120 毫升。原精液的活力(大於 0.6)必須合格。(1ml 精液約為 1 克)

　　

3. 精液稀釋相關數據的計算

　　

原精液總精子數=原精液體積(或重量)×原精液精子濃度*活率(活率通常 為 0.9—1，考慮有畸形精子)

　　

原精液可分裝的份數=原精液總精子數÷每份精液的總精子數(通常 40 億) (取整數部分，不按四捨五入，而是捨去小數點後面的數)

　　

原精液稀釋後的最終體積(或重量)=可分裝的份數×每份精液的體積(100 或 120ml) 最大稀釋的倍數最好不超過原精液體積的 10 倍。

　　

舉例說明：某頭公豬一次採精精液的重量為 230ml(或克)，經測定精子濃度為 1.8 億/毫升(或克)，規定每份精液的總精子數為 40 億，體積為 100 毫升 (或重量 100 克)，計算原精液稀釋後最終的體積或重量。(以重量計算)

　　

總精子數=原精液體積 (或重量) ×原精液精子濃度=230×1.8= 230*1.8 =414 億(是不是還有個活力問題?414*活力)

　　

原精液可分裝的份數=原精液總精子數÷每份精液的總精子數= 414÷40=10.35 份 實際按 10 份計算。

　　

原精液稀釋後的最終重量=可分裝的份數×每份精液的重量=10×100=1000 克(所需的稀釋液為 1000-230=770 克) 稀釋後總重量小於原精液量的 10 倍(即 2300 克)，說明稀釋倍數在正常範圍內。

　　

特殊情況：如果精子濃度很高，則可先進行 5 倍左右的稀釋，搖勻後，過 30 分鐘後，再將剩餘的稀釋液加入，混合均勻。兩次稀釋後，總稀釋體積也不能超 過原精液體積的 15 倍，但不推薦這樣。

　　

4. 稀釋過程

　　

把空塑料杯或大燒杯放在電子秤上，除去皮重，然後將原精液從集精杯中提出，放入杯中，根據計算出的稀釋後的最終重量，將與精液等溫的稀釋液緩緩加 入杯中，直到重量達到最終稀釋後總重量為至。如上例，原精液與稀釋液的總重量應為 1000 克。稀釋加入後，應輕輕搖動或用潔淨的玻璃棒攪拌精液，使其混合均勻。

　　

精液稀釋要注意以下事項：

　　

(1)精液和稀釋液的溫差應儘可能小或是在等溫情況下進行稀釋。

　　

精液稀釋關鍵是溫度，在精液稀釋前，必須使精液和稀釋液儘可能等溫，在溫度下降到 32 攝氏度以前， 兩者的溫度最多相差 1℃。否則就可能對精子的活力產生不良影響。如果可能，在精液品質檢查過程前，應將裝精液的集精袋放入大燒杯，然後將其放入同一個水浴鍋中， 待精液品質檢查完畢，一般精液的溫度與稀釋液溫度已經很接近了。但最好的辦法是根據季節，實測採集精液的溫度，以便在這個季節中，採精前，將水浴鍋溫度事先設定在合適的溫度值上。

　　

(2)應將稀釋液加入精液中，而不應該相反。

　　

(3)稀釋液應儘量從低處沿杯壁流入裝精液的大燒杯中，避免將稀釋液從高處倒下，形成衝擊。

　　

5. 精液的分裝

　　

精液的分裝可以先稀釋精液，再進行分裝，也有先將鮮精根據每份的應加入 的原精液量分裝於精液容器中，再加入稀釋液。但我們推薦第一種方法。

　　

5.1 精液分裝的體積

　　

精液容器既是精液貯存的地方，又是輸精時的容器。也就是說，分裝時，是按每頭母豬一次輸精的劑量進行灌裝的。精液容器種類不同，其容量也不同，一 般可容納的總體積為 80 毫升，100 毫升，袋裝精液往往能裝到 120 毫升。從形 狀上可分袋裝精液、 瓶裝精液、 牙膏式管裝精液等。 最常用的是瓶裝和袋裝兩種。

　　

5.2 分裝方法

　　

瓶裝精液較容易分裝，一是它有蓋，瓶口較大，二是它有刻度。將塑料杯或燒杯 中上口翻卷到外壁的食品袋拉緊，然後將精液從杯嘴處向精液瓶中注入精液，直 到達到相應刻度值。但是要注意，分裝時精液瓶不能直接與桌面接觸，下面應該 墊有乾燥的毛巾防止精液溫度散失。 瓶裝精液加至刻度線後，上部仍會有一定的空間，會存留空氣，對精子保存 不利， 可先將精液瓶蓋旋上半圈， 然後， 輕輕擠壓精液瓶， 使精液上升至瓶口處， 旋緊瓶蓋，這樣精液瓶內基本上沒有空氣。 袋裝精液分裝時較為困難，如果購買昂貴的精液分裝機，肯定大多數場、站 不能接受。建議的分裝方法是：一個有機玻璃架(分裝架)，頂上安裝兩個螺釘，用來將精液袋的兩孔掛在上面， 在架上有兩個有機玻璃孔或金屬箍用來固定漏鬥使漏鬥的玻璃管插入精液袋中。將分裝架連同漏鬥、精液袋放在電子秤上，打開 電子秤，除皮，然後將精液從漏鬥口加入精液袋中。 當重量達到規定重量時，取下精液袋，放在熱封口機上，排出空氣後，封口。

　　

5.3 標記與降溫

　　

稀釋的精液分裝後，應在輸精瓶(袋)上貼上標籤(也可用標記筆標記)， 註明分裝日期、公豬號、品種、失效期。分裝後，應將輸精瓶(袋)放在泡沫塑料箱中， 讓其緩慢降溫 (在 22—25℃環境溫度下 1 小時左右) 大約達到 20-25℃ 時，將裝有分裝過的輸精瓶(袋)放入 17 攝氏度(15～18℃)的恆溫冰箱中保存。

　

1.保存溫度不應低於 15℃，不高於 20℃，最佳保存溫度為 17℃

　　

如果有條件應儘量使用恆溫設備來保存精液，應注意不可將精液保存在普通冰箱中，因為普通冰箱冷藏室內最高溫度為 8℃，而豬的精液的最低保存溫度不能低於 14℃。 也不宜將稀釋後的精液保存在 20℃以上的室溫下， 即使室溫在 16～ 20℃範圍內，也最好不要求在這種環境中保存，因為室溫日夜變化太大，除非 24 小時內就使用，否則不能在這種環境下保存。適當降低保存溫度有利於延長 精子的存活期，減少代謝產物對精子的傷害。但溫度不可低於 16℃，否則精子 就會受到損傷。在各種動物中，豬的精子對溫度的變化十分敏感，尤其是低溫， 其原因不詳。豬的精子對較高保存溫度(20～25℃)有一定的耐受力，如果保存時間在 12 小時內，精子活力不會受到什麼影響。 我們推薦的保存溫度是 17℃，上下溫差不超過 2℃。

　　

2.精液稀釋分裝後應儘可能在 72 小時內使用完

　　

平時要有經常檢查保存精液精子活力的習慣。

　　

如果保存時間超過 48 小時用前應進行活力檢查，一般稀釋液如果精液的保存時間超過 72 小時，就應廢棄。應該注意的是，自精液被稀釋分裝保存開始， 在有效的保存時間內，精子的受精能力是逐步下降的，儘管精液保存 96 小時， 受胎率仍沒有明顯降低，但在 72 小時用完，受胎率是十分可靠的。 每天隔 8—12 小時將精液搖勻一次。 在精液保存中，精子會沉澱到底部， 每天應由工作人員分兩次輕輕搖動或上下翻轉輸精瓶(袋)，使精液再次混合後再放入保溫箱中。

　　

3.精液保存的設備

　　

(1)常規保存設備

　　

一般應使用專用的恆溫冰箱，它能夠保證在氣溫較高時製冷降溫，在氣溫較低時加熱，在供電正常的情況下全天候使用，而恆溫(培養)箱通常只能在氣溫較低的情況下使用，高於精液保存溫度的氣溫，則保溫箱無控溫能力。精液的保存環境重點是溫度， 應儘可能使溫度在合適的範圍內，保存容器應使精液不受強光的影響。 沒有全面開展人工授精的豬場，從其它場購回的精液，可存放在地窖中，地窖溫度一般在 15～25℃。可進行精液的短期存放，但在使用前應進行精子活力的檢查。

　　

(2)停電或冰箱故障的應急措施

　　

豬的精子對低溫十分敏感，因此，重點要防止精液溫度過低。 如果恆溫冰箱停電或出現故障，在適宜的室溫條件下，即室溫在 15～25℃內 變化，可不必採取特殊措施，因為這種室溫下，對精液的短期存放不會有太大影 響。 停電時間如果不超過 3 小時， 一般也不會有太大問題。 但如果氣溫高於 25℃ 或低於 15℃，則需要進行特殊處理。在冬季可將熱水袋或輸液瓶充入 50～70℃ 的熱水用厚毛巾包好， 放入冰箱中， 使其緩慢散熱; 在夏季， 則可用袋裝冰塊 (可用普通冰箱製冰) 同樣用毛巾包好， 放入冰箱中。 2 小時觀察一次箱內溫度， 每使箱內溫度在 16～20℃之間，如果溫度不合適，應調整水溫或增減外部隔熱材料的厚度，以控制散熱或吸熱的速度。

　　

4.注意定期搖動

　　

保存過程中要求每 8—12 小時將精液混勻一次,防止精子沉澱而引起死亡。