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紫外可見分光光度計原理是：
分子的紫外可見吸收光譜是由於分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光後，發生了電子能級躍遷而產生的吸收光譜。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息。可以用標準光譜圖再結合其它手段進行定性分析。
根據Lambert-Beer定律：A=εbc，（A為吸光度，ε為摩爾吸光係數b為液池厚度，c為溶液濃度）可以對溶液進行定量分析。
你可以用紫外可見分光光度計測定定三種農藥的波長在某溶液中的最大、最小吸收波長。
配製溶液－在光譜檢測項下進行－調整檢測光譜範圍及速度－－掃描光譜圖－－吸光度最大處對應波長為最大吸收波長，吸光度最小處對應的波長為最小吸收波長。
1.光源燈;2.濾光片;3.球面反射鏡;4.入射狹縫;5.保護玻璃;6.平面反射鏡;7.準直鏡;8.光柵;9.保護玻璃;10.出射狹縫; 11.聚光鏡;12.試樣室; 13.光門;14.光電管.
分光光度計工作原理:
由光源燈(1)發出連續輻射光線,經濾光片(2)和球面反射鏡(3)至單色器的入射狹縫(4)聚焦成像,光束通過入射狹縫(4)經平面反射鏡(6)到準直鏡(7)產生平行光,射至光柵(8)上色散後又以準直鏡(7)聚焦在出射狹縫(10)上形成一連續光譜,由出射狹縫選擇射出一定波長的單色光,經聚光鏡(11)聚光後,通過試樣室(12)中的測試溶液部分吸收後,光經光門(13)再照射到光電管(14)上.調整儀器,使透光度為100%,再移動試樣架拉手,使同一單色光通過測試溶液後照射到光電管上.如果被測樣品有光吸收現象,光量減弱放大器處理,將光能的變化程度通過數字顯示器顯示出來.可根據需要直接在數字顯示器上讀取透光度(T),吸光度(A)或濃度(C).
基本操作:
(1)通電---儀器自檢----預熱20min;
(2)用鍵設置測試方式:透射比(T),吸光度(A),已知標樣濃度方式(C)和已知標樣濃度斜率(K)方式;
(3)波長選擇:用波長調節旋鈕設置所需的單色光波長;
(4)放樣順序:打開樣品室蓋,在1~4號放置比色皿槽中,依次放入%T校具(黑體),參比液,樣品液1和樣品液2.
(5)校具(黑體)校"0.000":將%T校具(黑體)置入光路,在T方式下按"%T"鍵,此時儀器自動校正後顯示"0.000"
(6)參比液校"100"%T或"0.000"A:將參比液拉入光路中,按"0A/100%T"鍵調0A/100%T,此時儀器顯示"BLA",表示儀器正在自動校正,校正完畢後顯示"100"%T或"0.000"A後,表示校正完畢,可以進行樣
品測定.
(7)樣品測定:將兩樣品液分別拉入光路中,此時若在"T"方式下則可依次顯示樣品的透射比(透光度)若在"A"方式下,則顯示測得的樣品吸光度.
7200型光柵分光光度計的使用注意事項(1)
(1) 預熱是保證儀器準確穩定的重要步驟.
(2) 比色皿的清潔程度,直接影響實驗結果.因此,特別要將比色皿清洗乾淨.先用自來水將用過的比色皿反覆衝洗,然後用蒸餾水淋洗,倒立於濾紙片上,待幹後再收回比色皿盒中.必要時,還要對比色皿進行更精細的處理,如用濃硝酸或鉻酸洗液浸泡,衝洗.
(3) 比色皿與分光光度計應配套使用,否則會引起較大的實驗誤差. 比色皿不能單個調換 1.3 7200型光柵分光光度計的使用注意事項(2)
(4) 比色皿內盛液應為其容量的2/3,過少會影響實驗結果,過多易在測量過程中外溢,汙染儀器. 比色皿中試樣裝入量應為2/3～3/4之間
(5) 拿放比色皿時,應持其"毛面",杜絕接觸光路通過的"光面".如比色皿外表面有液體,應用綢布拭乾,以保證光路通過時不受影響.
(6) 若待測液濃度過大,應選用短光徑的比色皿,一般應使吸光度讀數處於0.1～0.8範圍內為宜.由於測定空白,標準和待測溶液時使用同樣光徑的比色皿,故不必考慮因光徑變化而引起的影響.
UV-754型紫外-可見分光光度計正確使用方法
2.1 紫外分光光度計法概述(1)
2.1.1定義 用紫外光源通過分光光度技術對物質進行測定的方法叫作紫外分光光度法.所使用的儀器叫作紫外分光光度計.
2.1.2原理 因為許多化合物的分子結構中存在共軛雙鍵,在200～400nm的紫外光區具有吸收光的特性,所以無需進行顯色反應便能直接測定.
2.1.3應用 常用於對蛋白質和核酸進行定性,定量測定.蛋白質分子中所含酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸等芳香族胺基酸殘基在波長280nm處具有最大吸收峰.故常用波長280nm處的吸光度測定蛋白質的濃度.
2.1.4特點
(1) 組成核酸的鹼基也含有共軛雙鍵,其最大吸收峰的波長在260nm處.但在280nm處也有一定的光吸收,對蛋白質的測定有一定的幹擾作用.若分別測定280nm和260nm處的吸光度,可通過經驗公式消除核酸對蛋白質測定的影響.
(2)可對微量蛋白質(1～10g/L)不需顯色,進行直接定量測定.因此操作簡便,而且可回收樣品.此外,鹽類在280nm處無光吸收,少量鹽類也不會影響測定結果.
(3)紫外分光光度法完全符合Lambert-Beer定律的基本原理.在其它條件保持一致的情況下,被測溶液的吸光度與被測溶液的濃度成正比.
2.2 UV-754型分光光度計的結構和工作原理
2.2.1儀器結構 由光源(鎢燈或氚燈),單色器,試樣室,接受器(光電管),微電流放大器,A/C 轉換器,印表機,鍵盤和顯示器等部件組成.微處理機(CPU)通過輸入,輸出口(I/O)對微電流放大器,顯示器和印表機等部件進行 控制,實現儀器的整體功能.
2.2.2工作原理
UV-7 5 4型紫外-可見分光光度計光學系統
1.氚燈;2.鎢燈;3.濾光鏡;4.聚光鏡;5.入射狹縫;6.平面;7.準直鏡; 8.光柵; 9.出射狹縫; 10.聚光鏡; 11.試樣室; 12.光門; 13.光電管
2.2.2工作原理
由光源氚燈或鎢燈(1或2)發出連續輻射光線經濾光鏡(3)和聚光鏡(4)至單色器入射狹縫(5)處聚焦成像,再經平面反射鏡(6)反射至準直鏡(7)產生平行光射至光柵(8)在光柵上色散後又經準直鏡(7)聚焦
在出射狹縫(9)上成一連續光譜,經出射狹縫射出的光在聚光鏡(10)聚光後分別通過試樣室 (11)中的空白溶液(或對照溶液),標準溶液或樣品溶液,被部分吸收後光經光門(12)再照射到光電管(13)上.被光電管接收的光信號再被轉換成電信號,後者通過輸入,輸出口(I/O).進入微處理機進行調零,變換對數,濃度計算以及列印數據等處理,將檢測結果通過顯示器和列印系統顯示出來.
2.3 UV-754型分光光度計使用方法(外型)
2.3.1 UV-754型紫外可見分光光度計
1.試樣架拉手;2.鍵盤部分;3.數據列印;4.波長刻度盤; 5.波長手輪;6.電源汗關;7.氚燈觸發按鈕;8.光源室.
2.3 UV-754型分光光度計使用方法(鍵盤) UV-754型紫外-可見分光光度計 鍵盤詳細內容說明如下:
2.3 UV-754型分光光度計使用方法(鍵盤內容1) ① 功能鍵: F1～F8,暫無功能,備擴展使用. ② T鍵: 具有三種透光度狀態調節功能.
③ A/C鍵:吸光度/濃度轉換鍵,按此鍵可分別表示"吸光度0～3A","吸光度0～0.lA","吸光度0～0.1A"和"濃度"四種狀態.
④ 送入鍵:只在"A/C鍵"處於"濃度"狀態時才起作用. ⑤ 列印鍵:手動方式時有效,每按一次,便列印一次數據.
⑥ 控制鍵:在分別使用"設定+","設定一","倍率","顯示方式"和"列印方式"各鍵時,需與控制鍵分別聯合使用才起作用.
⑦ 設定+鍵:在"A/C鍵"處於"濃度"狀態時才能設定"標準濃度值","斜率K值"或"斜率B值"等數據.其功能是將設定數值增加.
2.3 UV-754型分光光度計使用方法(鍵盤內容2) ⑧ 設定- 鍵:是使設定數值減小,操作與"設定+鍵"類同.
⑨ 倍率鍵:用來設定標準溶液濃度的放大倍數.有"1","0.1"和"0.01"三檔,與"控制鍵"同時按下,倍率便發生相應的變化.
⑩ 顯示方式鍵:可表示"積分","濃度"和"樣品號"三種狀態.
(11) 列印方式鍵:存在"自動"(每移動一次試樣架,儀器自動列印一次數據),"方式1"(手動方式,每按一次此鍵,儀器列印一次數據)和"方式2"(每分鐘定時列印一次數據)三種狀態.每與"控制鍵"同時按一次此鍵便改變一個狀態.
(12) 送紙鍵:每按一次此鍵,儀器移動一次列印紙. (13) TAC:數字顯示器顯示測定結果或輸入的數據. 2.3.2 UV-754型紫外可見分光光度計使用方法(1) (1) 測試準備
① 將盛有"空白"或"對照"溶液的比色皿處於試樣室光路位置; ② 選擇波長 旋動波長手輪選定所需波長;
③ 確定光源 波長在200～290nm時,選擇氚燈為光源;波長在290～360nm時,同時以氚燈和鎢燈為光源;波長在360～850nm時,選擇鎢燈為光源;若使用氚燈,需按氚燈觸發按鈕啟動;
④ 儀器自檢 顯示器顯示"754"後,數字顯示出現"100.0",表明儀器通過自檢程序,此時儀器進入"0～100%","連續"和"自動"狀態(列印系統處於自動列印狀態)
⑤ 儀器預熱30min後方可進行測試.
2.3.2 UV-754型紫外可見分光光度計使用方法
測試過程
① 數字顯示透光度"100.0"(或吸光度"0.00")2～3s後,將盛有標準溶液的比色皿移至光路,列印系統便自動列印出所得數據;
② 將盛有樣品溶液的比色皿移至光路,列印系統即自動列印出該樣品的數據.待第一個樣品數據列印完畢後,將第二個樣品置於試樣室光路………,若有多個樣品,操作以此類推。
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