如果凝膠漂浮於液體表面,可用數支巴斯德吸管將其壓下去。準備轉移用,膜
8.用乾淨的手術刀或切紙機切一張每邊均比凝膠大1mm的尼龍膜或硝酸纖維素膜。此外,再切兩張與膜同樣大小的厚吸水紙。
▲對膜進行操作時需使用適當的手套以及鈍頭鑷子(如Mllipore鑷子)。用沾有油汙的手摸過的膜不易浸溼
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9.將膜漂浮於盛有去離子水的皿中,直到膜從下往上完全浸溼,然後將膜浸泡於適當的轉移緩衝液中至少5min。用乾淨的手術刀片切下膜的一角,與凝膠切下的一角相一致。
不同批號的硝酸纖維素膜的潤溼速宰變化很大。如果膜在水中浸泡數分鐘後仍不能完全沒溼,中性或帶電荷的尼龍膜通常不會發生溼潤不均勻的問題。
組裝轉移裝置及DNA的轉移將DNA轉移至不帶電荷的膜時,使用中性轉移緩衝液(10XSSC 或10XSSPE)。將DNA轉移至帶電荷的尼龍膜時,使用鹼性轉移緩衝液(0.4 mol/L NaOH及1mol/L NaCl)。
10. DNA進行變性的過程中,將一張厚的吸水紙放在一片樹脂玻璃板或玻璃皿上,形.成一個比凝膠長且寬的支撐物。吸水紙兩端需要超出皿的邊緣。將支持物放於一個大的幹烤皿中。支持物可以放在4個氯丁橡膠塞上,將其從皿的底部墊高。
11.皿中放入適當的轉移緩衝液直到液面幾乎與支持物表面平齊。當支持物上的吸水紙完全溼潤後,用一隻玻璃棒或吸管趕走氣泡。
12.將凝膠從步驟7中的溶液中取出並倒轉使原來的底面向上。將倒轉的凝膠放在支持物上並位於吸水紙中央。