標準曲線製作、檢驗與使用!

2021-02-23 實驗室儀器分析

不能。通常的標準系列多是配製0,1,2,3mg/L系列這樣的說法,沒做實驗人為添加(0,0)很不妥,因為很多時候0管進入儀器可能也有響應值,這也是我們考察試劑空白的一個重要步驟。這個0管在某些時候非常重要,比如全血鉛測定,我們採用牛血清來基體匹配標準系列,如果此時你用酸做空白或沒做實驗人為添加(0,0),那你就很難做好標準曲線。所以標準曲線的0管也是做好標準曲線的重要考慮點。

標準曲線需要減掉試劑空白來做嗎?

不需要。儀器測出來標準系列的響應值可以減掉試劑空白或減掉0管的響應值來做,工作中我們也常用0管來做儀器調零。其實沒有必要那麼麻煩,即使空白或0管有響應值,在構建標準曲線時,我們已經認為該響應值就是0濃度,也就是扣除了這個空白的。

什麼時候用Y=bX和二次曲線呢?

標準曲線我們通常採用的是Y=a+bX,曲線擬合完必須要做統計檢驗,且要做統計完備的線性檢驗和失擬檢驗,然後再做a與0的差別檢驗,如果a與0的統計學上無差異,你就可以考慮用Y=bX的擬合曲線,擬合出來後同樣做線性檢驗和失擬檢驗,如果線性檢驗合格(P<0.05)且失擬檢驗合格(p>0.05)此時你就可以採用Y=bX。二次曲線的採用同樣是這樣的道理,如果你Y=a+bX時擬合不合格,你就考慮用Y=a+bX+cX2,同樣做失擬檢驗,考察擬合的符合情況。如果Y=a+bX和Y=a+bX+cX2都滿足擬合檢驗和失擬檢驗合格,則採用Y=a+bX形式,這樣符合統計學上參數最少的統計簡潔性原則。

標準曲線去查含量時是先減空白信號算樣品含量還是先算出空白含量相減呢?

工作中我們常要減掉空白得到樣品含量,現有國家標準方法有的推薦先算出空白含量,用樣品含量相減,也有推薦先用樣品信號減空白信號然後去標準曲線推算含量。而且這兩種算法常常差距很大。其實這種差距往往是低含量水平時才出現,在低含量水平通過標準曲線推算含量時,本身不確定度就很大。這兩種方法都可以。個人推薦先用樣品信號減空白信號然後去標準曲線推算含量,因為這樣出來的含量不確定度要小一些,而先算出空白含量再相減就增加了1次標準曲線推算含量時的不確定度,因為好的測量永遠是不確定度小的測量。

如何做兩條標準曲線的檢驗呢?

1.先從原理上講:判斷兩條或多條標準曲線的差異,須檢驗殘差,截距和斜率三項,分別有不同的統計學參數,殘差用F檢驗,截距和斜率採用較為複雜的統計量。

2、從實際操作講:多用協方差分析檢驗截距和斜率的差異,以SPSS為例:

①先重新整理數據,將y2數據列加到y1下面,變成一個變量y;將x2數據列加到x1下面,變成一個變量x;然後再設定一個新的分組變量group,原來第1組值為1,第2組值為2。

②進行協方差分析(第一步分析斜率是否無差異)。Analyze->GeneralLinear Model->Univariate Dependent List:填入y—將y做為因變量 Fixed Factor:填入group Covaraites:填入x—將x做為協變量 Model:選Custom Model:填入x groupx*group—注意如果變量填入順序不一樣,結果也會不一樣。Sum ofsquares下拉列表框:選TypeI然後點擊ok,看結果裡x*group這一行的Sig.P值,若大於0.05,則接受原假設,即兩條回歸直線的斜率無差異,否則拒絕。

③再來進行截距的無差異分析其實過程跟上面一樣,只是Model裡去掉了x*group交叉項.Analyze->GeneralLinear Model->Univariate Dependent List:填入y—將y做為因變量Fixed Factor:填入group Covaraites:填入x—將x做為協變量Model:選Custom Model:填入x group—注意如果變量填入順序不一樣,結果也會不一樣。Sum of squares下拉列表框:選TypeI點擊ok後,看group一行的Sig.P值,若P值大於0.05說明兩條回歸直線截距也無差異,若小於0.05說明截距是有差異的。

標準系列的標準溶液體積取

用中有效數字該如何寫呢?

標準溶液體積取用的有效數字跟你採用的體積量具有直接關係。比如說量取或準確量取等字眼,10mL和10.0mL提示你要採用不同的量具。當我們使用某個量具完成某次體積取用後,讀數是按照量具的最小允差決定的,而最小允差是針對最小分度線而言的。當取用10mL體積時,如果用A級10mL的分度吸管,那麼10.0mL應該是確定的,因為它的分度線為0.1mL。當取用1mL體積時,如果用A級1mL的分度吸管,那麼1.00mL應該是確定的,因為它的分度線為0.01mL。所以個人意見,到底寫10.00還是10.0以最小分度線來確定,最小分度線以下的都為估讀。如果你認為估讀也是有效數字的話,10.00mL也可以,因為此時的容量允差為0.05mL,但1.000mL就沒有太大意義了,因為A級1mL的分度吸管的容量允差已經是0.008mL了。

標準曲線的相關係數的

有效數字該如何保留呢?

GB5750.3-20068.2.7項有如下規定:校準曲線相關係數隻舍不入,保留到小數點後出現非9的一位,如0.99989→0.9998。如果小數點後都是9時,最多保留小數點後4位。

標準系列一般都是配製不同濃度,進樣相同體積來做的(濃度法)。但實際工作中我們還用到同一濃度來進樣不同體積的方式來做(體積法),濃度法與體積法的區別在於濃度法中與待測物質存在的溶劑/待測物質的比例與體積法不同。濃度法中溶劑的環境(體積)基本是一致的,這樣的好處就是濃度法在判斷溶劑(或溶劑中幹擾物質)和待測物質的指認上更加容易。體積法中幹擾物質也會隨標準系列增加,不容易實現待測物質的指認。從進樣針,進小體積時不確定度比較大,帶來的直接結果時標準曲線不如濃度法容易做直。而且物理體積的限制,體積法不太容易實現較大跨度的濃度系列設置。總之,體積法和濃度法本質上是一致的,但濃度法有:容易做好標準曲線,容易實現較大濃度跨度和容易實現待測物質的指認等優點。

標準曲線查出樣品是負值,如何報告結果呢?

這種情況下我們一般選擇四種方式報告結果:未檢出,<檢出限,<定量限,<標準曲線第一點所推算的樣品濃度。四種都有道理,實際區別是埋在四種選擇下面的結果報告人的風險。未檢出的全部含義應該是本實驗室本儀器本方法未檢出,如果沒有這些界定,未檢出的歧義很多,而且沒有提供其它任何可用的信息。所以建議學生一般不採用這種報告方法;檢出限是定性檢出的標誌,它是跟空白的統計比較計算出來的。每臺儀器,每次測定都有其檢出限,檢出限計算目前有兩大類計算方法:單濃度方法和校正設計法(Anal.Chem.1997,69:3069),常規採用的單濃度方法需要額外的工作,所以現在趨向用校正設計法,既利用標準曲線直接計算檢出限,但檢出限I類和II類錯誤皆控制在0.05。定量限是可以定量檢出的標誌,其RSD定為10%,其II類錯誤比檢出限小很多。<標準曲線第一點所推算的樣品濃度,是我們儀器比較可信的測定濃度。總之,報告<檢出限,<定量限,<標準曲線第一點所推算的樣品濃度所犯I類和II類錯誤依次降低,但如果這個報告結果已經超過你要判斷的限值,那麼你的檢測就一點意義都沒有了。所以現在的檢測單位甚至直接報告小於國家標準規定的限值,從概率統計的角度講,它犯錯誤的機率最小,但又解決了客戶的檢測問題。

空白測出來是負值,該不該減呢?

空白代表你所選擇的空白對儀器響應/信號的影響,當然可能是正方向和負方向的影響,所以理論上講必須減掉空白。至於是先減空白信號,還是減空白測定值,按國家規定或參見4.4問題。

線性範圍(動態範圍)的最低點

和最高點如何確定呢?

配置一系列濃度標準,包括0濃度,從低濃度開始擬合當擬合檢驗出現P>0.05的最高的那個濃度點為止。有也經驗說當加入的高濃度點在低濃度點構建的直線方程推算的響應超出±10%範圍。關於線性範圍的最低點應該是0、檢出限或是定量限的問題,個人趨向最低點為0,因為線性範圍只是統計學上線性的表現,跟能否準確定量是兩方面的問題。

相關焦點

  • 標準曲線製作、檢驗、使用知識大全
    通常的標準系列多是配製0,1,2,3mg/L系列這樣的說法,沒做實驗人為添加(0,0)很不妥,因為很多時候0管進入儀器可能也有響應值,這也是我們考察試劑空白的一個重要步驟。這個0管在某些時候非常重要,比如全血鉛測定,我們採用牛血清來基體匹配標準系列,如果此時你用酸做空白或沒做實驗人為添加(0,0),那你就很難做好標準曲線。所以標準曲線的0管也是做好標準曲線的重要考慮點。
  • 分析測試中標準曲線的製作、檢驗及使用
    標準曲線我們通常採用的是Y=a+bX,曲線擬合完必須要做統計檢驗,且要做統計完備的線性檢驗和失擬檢驗,然後再做a與0的差別檢驗,如果a與0的統計學上無差異,你就可以考慮用Y=bX的擬合曲線,擬合出來後同樣做線性檢驗和失擬檢驗,如果線性檢驗合格(P<0.05)且失擬檢驗合格(p>0.05)此時你就可以採用Y=bX。
  • 分析檢測中標準曲線製作、檢驗、使用中問題等相關問題探討!
    標準曲線我們通常採用的是Y=a+bX,曲線擬合完必須要做統計檢驗,且要做統計完備的線性檢驗和失擬檢驗,然後再做a與0的差別檢驗,如果a與0的統計學上無差異,你就可以考慮用Y=bX的擬合曲線,擬合出來後同樣做線性檢驗和失擬檢驗,如果線性檢驗合格(P<0.05)且失擬檢驗合格(p>0.05)此時你就可以採用Y=bX。
  • 如何繪製標準曲線?
    在真實的實驗過程中,製作標註曲線會遇到各式各樣的問題,比如標註曲線彎曲、線性不夠好等問題,造成不同情況的原因是什麼呢?1、儀器校驗好。2、移取液體體積要精確,保證迅速準確,儘可能用一根移液管;為減小人為誤差,同一種液體要一個人操作。3、保證標準品的純度,所用標準品最好是新打開的,純度較高的固體或溶液,防止汙染。4、容器要保證潔淨。
  • 作標準曲線是否真的那麼簡單?
    標準曲線的製作要求按GB/T22554-2010《基於標準樣品的線性校準》推薦:1、標準曲線的濃度範圍應覆蓋正常操作條件下的被測量範圍;2、標準樣品的組分儘量與被測樣品組分一致;3、標準樣品的濃度值應等距離的分布在被測量範圍;4、標準樣品的個數至少應有
  • 如何使用軟體繪製ROC曲線
    一、ROC曲線的繪製 假設我們今天要做一個評價兩種檢測方法優劣的研究,而且我們已經有一種臨床公認的最準確的診斷方法(金標準)。我們知道ROC曲線上每一個點對應一個四格表,製作ROC曲線的本質就是在一個正方形的坐標系裡描繪出這些點。這個坐標系需要用金標準來描繪,四格表則需要待評價方法的檢測結果計算出來。
  • 食品理化檢驗方法主要內容和使用要點解讀(下)
    本期食品理化檢驗方法主要內容和使用要點解讀延續上兩期內容,重點闡釋技術要求中的其他內容和方法使用的注意要點。  分析步驟  儀器參考條件:方法中會給出儀器參考條件,如色譜儀、色譜柱、流動相、程序升溫條件、檢測器、質譜參數等。
  • uv印表機PrintFactory曲線製作教程
    請確定需要製作曲線的uv印表機物理狀態及實時狀態穩定,無步進或飛墨等現象,以給客戶打樣的標準為參考標準。要儘可能保證製作曲線時的環境與客戶生產時的環境相近或者一致。本次說明, 將以使用 Barbieri spectro LFp 儀器製作車貼 6C 6pass 曲線為例, 簡單地描述一下製作曲線的整個流程。
  • 生存曲線的 log-rank 檢驗
    生存曲線的比較:兩條或多條生存曲線的差別比較是生存分析的主要內容之一。
  • 如何使用南方CASS製作標準地形圖
    經常會遇到有朋友需要製作標準地形圖,可以使用水經注萬能地圖下載器下載衛星地圖和高程數據製作。步驟  第一步:下載數據  打開水經注萬能地圖下載器,切換地圖到谷歌高程數據,下載高程數據並導出為tif格式,坐標系選擇西安80坐標系(圖1),同時導出高程點為dat格式。同樣的方式下載衛星地圖也導出80坐標系(圖2)。
  • 如何建立校準曲線
    校準曲線包括標準曲線和工作曲線,前者用標準溶液系列直接測量,沒有經過預處理過程,這對於樣品往往造成較大誤差;而後者所使用的標準溶液經過了與樣品相同的消解
  • 如何判斷校準曲線是否合格?
    校準曲線(或工作曲線)的選擇①校準曲線:標準溶液處理程序較樣品有所省略,如樣品預處理;工作曲線:標準溶液處理程序及分析步驟與樣品完全相同;②在樣品基體不幹擾測定的情況下,採用標準曲線法,即用標準溶液直接配製標準系列,進行測定;(基體:除待測元素以外的元素統稱為基體
  • 食品理化檢驗方法使用解讀
    沒有食品安全標準的,應當採用依照法律法規制定的臨時限量值、臨時檢驗方法或者補充檢驗方法;風險監測、案件稽查、事故調查、應急處置等工作中,在沒有前款規定的檢驗方法的情況下,可以採用其他檢驗方法分析查找食品安全問題的原因,所採用的方法應當遵循技術手段先進的原則,並取得國家或者省級市場監督管理部門同意。第三十四條規定,復檢機構實施復檢,應當使用與初檢機構一致的檢驗方法。
  • AQL服裝國際檢驗標準
    ------AQL服裝國際檢驗標準AQL查檢概述AQL : ACCEPTABLE QUALITY LEVEL 驗收合格標準的縮寫,即平均質量水平,它是檢驗的一個參數,不是標準。AQL普遍應用於出口服裝,紡織品檢驗上,AQL的標準有:AQL0.010,AQL0.015,AQL0.025,AQL0.040,AQL0.065,AQL0.10,AQL0.15,AQL0.25,AQL0.40,AQL0.65,AQL1.0,AQL1.5,AQL2.5,AQL4.0,AQL6.5,AQL10,AQL15,AQL25 ,AQL40 ,AQL65,AQL100,AQL150,
  • 印製電路板的製作及檢驗
    1.印製電路板的製作 印製電路板的製作過程分為:底圖膠片製版、圖形轉移、腐刻、印製電路板的機械加工與質量檢驗等。 (1)底圖膠片製版 1)CAD光繪法 這種方法是應用CAD軟體對印製電路板進行布線後,使用獲得的數據文件來驅動光學繪圖機,使感光膠片曝光,經過暗室操作製成原版底圖膠片。
  • 礦用920螺旋管常德市檢驗標準
    礦用920螺旋管常德市檢驗標準 ,「ft4g5p2x」 帶鋼對接焊縫和與螺旋焊縫相交的丁字接頭所在的所有管道都已經過x光電視或膠片檢查。由於地板上沒有衛生潔具的排水管預留孔,衛生潔具的放置不受限制。用戶可以自由擺放潔具,滿足潔具的個性化需求。廠家可以提供多種擺放形式的廁所,提高了房子的檔次。
  • 平板電腦(MID)成品檢驗標準,值得收藏
    平板電腦(MID)成品檢驗標準檢 驗 作 業 指 導 書產品名稱:平板電腦成品檢驗標準(含ROHS)文件編號 SIP-ZJ/PZ-2-018 版次 A/11、 目的(此為通用標準,操作中必須參照每種產品之特性要求以及每批次的訂單要求和客戶之特殊要求。)2、適用範圍本標準適用本公司MID生產成品檢驗,驗證作業,除客戶特別要求外,QC100%全檢相關項目。
  • TC4鈦鍛件、TC4鈦合金鍛件質量檢驗的標準及方法
    【能源人都在看,點擊右上角加'關注'】TC4鈦鍛件、TC4鈦合金鍛件質量檢驗的標準及方法鈦鍛件缺陷的存在,有的會影響後續工序處理質量或加工質量,有的則嚴重影響鍛件的性能及使用,甚至極大地降低所製成品件的使用壽命,危及安全
  • 假設檢驗、Z檢驗與T檢驗
    有什麼證據支持這些說法,我們如何檢驗這些假設呢?作為一個統計愛好者,所有這些問題都挖掘了我對假設檢驗基本原理的舊知識。本文將討論假設檢驗的概念以及Z檢驗與t檢驗的區別。然後,我們將使用COVID-19案例研究總結我們的假設檢驗學習。
  • 防水鞋的製作標準
    所有防水鞋(包括射出結構的防水鞋)必須使用全面防水襪套,鞋墊之下中底之上也要有防水膜襪套。直接射出的防水鞋也不例外(參考圖片)防水襪套須使用以下材料:22毫米寬的hydroguard防水條;wave內裡(或Titan內裡)+2毫米泡棉+hydroguard防水膜+tricot