聚丙烯醯胺凝膠電泳的用途
聚丙烯醯胺凝膠電泳的用途:
在制膠前應準備玻璃板、垂直平板支架的安裝、密封好得玻璃板。
1、首先用洗滌劑將玻璃板反覆清洗乾淨,待玻璃板晾乾後,再將1mm塑料薄片沾少許清水,然後使其貼在玻璃板上,然後將另一塊凹行玻璃板與原玻璃板緊貼在一起。
2、再把貼好的玻璃板,然後放入垂直支架內側,兩側用鋼夾固定好,鋼夾的高度不能超過凹行玻璃的凹口處為準,兩側選用力度對稱、大小適中的鋼夾。
3、將1%的瓊脂糖加熱融化後,倒入支架板底槽中,然後將其密封起來,再使用容器吸取少量瓊脂溶液,加入到玻璃板兩邊的縫隙內側,將其密封,冷卻凝固後作為備用。
用30%的丙烯醯胺溶液10ml;10xTBE溶液4ml;雙蒸水16ml;20%的過硫酸銨(AP)200ul;TEMED溶液20ul配製PAGE凝膠。
把垂直支架傾斜30°,將配好的名為PAGE的凝膠溶液沿凹形玻璃平口處緩緩倒入至距平口7mm處為準,灌膠完成後,用槍吸取少量水密封膠口,壓平膠面即可,後續可以開始點樣電泳。
用微量移液器吸取1ul的溴酚藍溶液,根據PCR產物量大小吸取適量樣品,點入膠孔內即可。點樣結束後,即可接通電源,調節電壓至300V,90min,電泳時間根據PCR產物分子量可適當延長。
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