達文西的蒙拉麗莎是他所有畫作裡面最有名氣的一個了，所以很多人都去研究這幅畫背後到底有什麼含義，或者隱藏的秘密是什麼，有的還將蒙娜麗莎放大了從局部來分析蒙娜麗莎。蒙娜麗莎的微笑放大400倍又會是怎麼樣的呢?
蒙娜麗莎的微笑放大400倍把畫放大到400倍應該什麼都看不清楚了直接是一團的，完全無法去分析，所以有研究者將畫進行分層去慢慢的研究。
法國的光學工程師及物理專家帕斯克就發明了一種「層次擴大技術」，利用光線的反射去將畫進行進行層次分離，然後將各個圖層進行重建分析。
因為很多畫家在完成一幅畫作的時候都會不斷的修改，有時候開始畫的跟最後結束的時候會有一些區別，將最開始的想法埋藏在了下面。這個技術就可以將畫最初的樣子表現出來，看看蒙娜麗莎的微笑放大400倍後是什麼樣子的。
帕斯克將蒙娜麗莎分為了四個層次圖，第一個是達文西的肖像草稿，姿態跟現在的類似，但是尺寸要大上一些。
第二幅為《佩戴珍珠髮飾的肖像畫》，將草稿給覆蓋了，有專家分析這可能是文藝復興時期的聖女畫像。第三層為《麗莎·格拉迪尼肖像》;第四層就是我們現在看到的「蒙娜麗莎」
達文西發明了一種特殊的掩蓋技術，能夠通過頭部在身上覆蓋面紗，從而在原作基礎上作畫。在第三層中，麗莎·格拉迪尼是《蒙娜麗莎》的原型模特，她是佛羅倫斯絲綢富商的妻子。
不過畫家在作畫過程中塗塗改改非常常見，有時候也會在自己的畫作中隱藏上自己的名字和小癖好，或許達文西在畫畫的時候根本沒想那麼多。雖然把蒙娜麗莎的微笑放大400倍看不出什麼來，但是一般性的放大還是有很多發現的。
據英國《太陽報》報導，美國一名畫家宣稱破解了《蒙娜麗莎》畫作中隱藏了500年的秘密，在蒙娜麗莎頭部背景中有三隻動物在徘徊，分別是獅子、猴子和水牛。他還發現，在蒙娜麗莎的身體左側有一隻類似鱷魚或蛇的動物。
這名畫家名叫羅恩·皮西尼羅(Ron Piccirillo)，現年37歲。羅恩是在翻轉《蒙娜麗莎》的過程中，偶然注意到水牛的圖像。在隨後的兩個月中，他潛心研究達·文西日誌(da Vinci's journals)，最後得出隱藏動物圖像的結論。羅恩宣稱，這幅畫代表了妒忌，是七宗罪之一。
羅恩說：「蒙娜麗莎實際上是嫉妒的代表。這很令人驚奇，因為每個人都認為達·文西從未留下有關蒙娜麗莎的隻言片語，但現在看來，他顯然留下了線索。」
羅恩還解釋了蒙娜麗莎右手的不自然彎曲。他說：「這體現了她的輕視，意味著她可以用自己的力量反對上帝。」蒙娜麗莎的眼睛和鼻子周圍的影子圖案很像棕櫚樹，對此羅恩說：「畫家用棕櫚枝和橄欖枝傷害了她的眼睛，用月桂樹和櫻桃樹傷害了她的耳朵，意味著對於蒙娜麗莎來說，勝利和真理令人厭惡。」
幅畫上原本有24個秘密，但所謂秘密就是蒙娜麗莎的背後有小路、丘陵或者是頭紗是在畫完之後才畫上去，不過近幾年來發現的第25個秘密就是：「蒙娜麗莎的微笑」曾被認為沒有眉毛及眼睫毛，現在我們終於可首次確定這與事實不符!對要求完美同時又擅長解剖學的達·文西來說，不可能因為粗心而忘記畫上眉毛和睫毛，而目前畫作上的空白，在PascalCotte用多光譜相機還原真相之前，很多研究者進行了很多推論，例如年代久遠，導致畫作模糊了、色澤變淡之類的猜想。而PascalCotte最終用他的高科技在蒙娜麗莎的左眉上找到了一根「眉毛墨跡」。