培養細胞就像養育BABY一樣，要精心照料，用心呵護。最好每天都去看看它們，滿足它們所需要的物質需求，防止出現培養箱缺水、二氧化碳不足、溫度不夠等各種小意外，還要注意很多小細節，以免開展重複的實驗導致不必要的人力物力浪費。
那培養細胞都要注意哪些小細節呢？就讓我們一起來看看吧！
1.細胞生長的營養來源
不同的細胞的培養基是不相同的，對於大多數
腫瘤細胞來說，營養配方一般為：90%合成培養基（DMEM、RPMI1640、MEM等）和10%胎牛血清(FBS)；為了防止汙染，可以適時加1%雙抗，
抗生素的使用應為短期。
Q：細胞培養基配方如何選擇？
A: 一般購買細胞時，針對不同的
細胞株，會有詳細的介紹，包括生長的狀態圖、培養基的類型等。如人源肺癌細胞A549可用DMEM培養基，在胎牛血清的選擇上也可以選用大品牌、來源可靠的胎牛血清，能提供較好的營養成分，以滿足
細胞株生長的需要。
Q：如果細胞生長緩慢，需要增加血清比例嗎？
A：可以。
2.細胞生長的環境
舒適無菌的環境是細胞健康生活的重要基礎。需要合適的器皿，不同形狀、規格、用途多樣的培養皿、培養瓶及培養板等，最終進入合適的恆溫箱培養，如
腫瘤細胞就需37℃，5%CO2的恆溫箱中生長。
Q：細胞培養板及培養皿或培養瓶如何選擇？
A：根據不同的應用選擇不同的培養皿或容量板，如MTS用96孔板，細胞爬片用24孔，流式分析用6空等，具體應用可參見下表：
而選擇培養皿還是選擇培養瓶，就細胞培養狀態來說差別不大，主要是培養瓶的安全係數更高一些，數量也會大一些，但是成本也相對較高，因此沒有特殊要求時，一般用培養皿即可。
Q：血清是否要滅活處理，保證環境無菌？
A：這取決於您的應用。
滅活過程中，會導致血清中某些成分被破壞，如胺基酸，維生素，生長因子等。所以只有在您的實驗對血清有特殊要求時，才會考慮對血清進行滅活處理。如您的實驗對血清中的某種組分敏感，需要去除該組分。最常見的情況是需要去除血清中的補體蛋白，因為補體在機體中參與細胞殺傷，巨噬細胞和淋巴細胞活化，肥大細胞和血小板組胺釋放，平滑肌收縮等過程，所以一般在
免疫學相關研究中及肌細胞和
幹細胞的培養過程中需要對血清進行滅活處理。
另外，用gamma 射線輻照血清可滅活血清中的病毒，一般情況下，25-40kGy和30-45kGy是常用的輻射劑量。
3.細胞復甦與凍存
細胞復甦是指將凍存的細胞解凍之後再重新培養，細胞從冷凍停止生長狀態恢復生長的過程。復甦過程如下圖所示：
Q：細胞復甦後，為什麼很多難以貼壁？
A：忽略培養基的問題，主要考慮細胞凍存時狀態差或者復甦時動作太慢導致細胞死亡。切記最重要的融化速度要快，可不時搖動冷凍管，使之儘快通過最易受損的溫度段（-5～0℃）。
細胞凍存則是將細胞放在低溫（-70℃~196℃）環境，降低細胞內的代謝活動，最大限度的保存細胞活力，以便長期存儲。
Q：目前細胞凍存液多採用的什麼配方？
A：目前細胞凍存多採用DMSO二甲基亞碸或甘油作保護劑，細胞凍存液的配方有很多種，如培養基：血清：DMSO=7:2:1或8：1：1或5：4：1，或直接用血清：DMSO=9:1，一般高濃度血清有助於維護細胞活力，復甦存活率在80%～90%以上。
4.細胞的傳代培養
細胞在培養過程中不斷增殖，培養皿空間有限，細胞過密生長就會受到抑制，影響細胞的狀態，因此我們要把細胞中的一部分分到別的培養皿裡，這樣細胞才能生長的好。
Q：細胞傳代培養為什麼要選擇對數期細胞？
A: 細胞的生長和分裂，一般遵循以下模式：停滯期，對數期（指數期），平穩期（平臺期）和衰退期。為了確保活力，
遺傳穩定性和表型穩定，必須使細胞保持在對數期。一般細胞長到70%~80%左右就可以傳代了。
除了上述幾個環節的關節問題外，細胞培養還有很多小問題如下：
Q：培養基多久換一次？
A: 正常情況下，培養液偏紅色。如果細胞維持在pH6.5～6.6條件下，培養基變黃，說明培養液中代謝產物已堆積到一定量，細胞會脫落死亡，需要更換新鮮培養液。一般細胞生長旺盛時1～2天換一次，生長緩慢時，3～4天亦可。針對復甦後的細胞，建議隔天換液。
Q：血清應如何融解？
A：從冰箱中取出血清，放於2-8℃融化，融化過程中不時旋轉（swirling mix）混勻。充分融解後分裝或平衡到室溫後使用。
Q：如果細胞形態不清晰或有異物等，如何處理？
A：可以考慮如下操作：首先，倒掉舊的培養基，用新的培養基或者PBS洗滌2-3次，再開始正式的消化、吹打。其次，把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養瓶內。後續再密切觀察。
Q：血清中出現絮狀沉澱是否需要去除？如何去除？
A：多種原因可能導致絮狀沉澱的形成，最常見的原因之一是融化過程中，脂蛋白聚集所致。該現象一般不會影響產品質量。可以400g離心5分鐘，取上清，然後過濾。根據需要選擇合適的濾膜孔徑，一般最常用的是0.22um PES材質的濾膜。為避免濾膜阻塞，建議離心後取上清加入培養基內一起過濾而不是直接過濾血清。
總之，細胞培養是後續實驗的基石，留心各種細節問題，嚴守滅菌處理的程序，保護好自己養的細胞，這樣才能快樂地進行後續的實驗。
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參考文獻：
CELL CULTURE GUIDE t
ipsand techniques for continuous cell lines