細胞計數，看起來簡單，其實暗藏玄機。今天就一起來學習下如何計數。
計算細胞數目可用血球計數盤或是 Coultercounter 粒子計數器自動計數。
血球計數盤一般有二個 chambers，每個 chamber 中細刻 9 個 1 mm² 大正方形，其中 4 個角落之正方形再細刻 16 個小格，深度均為 0.1 mm。當 chamber 上方蓋上蓋玻片後，每個大正方形之體積為 1 mm²×0.1 mm=0.0001 mL。使用時，計數每個大正方形內之細胞數目，乘以稀釋倍數，再乘以 10000，即為每 mL 中之細胞數目。
存活測試之步驟為 dyeexclusion，利用染料會滲入死細胞中而呈色，而活細胞因細胞膜完整，染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍色之 trypan blue 染料，如果細胞不易吸收 trypan blue，則用紅色之 Erythrosin bluish。
計算細胞活率：活細胞數/（活細胞數+死細胞數）×100%。計數應在臺盼蘭染色後數分鐘內完成，隨時間延長，部分活細胞也開始攝取染料；因為臺盼蘭對蛋白質有很強的親和力，用不含血清的稀釋液，可以使染色計數更為準確。
（1）取 50 μL 細胞懸浮液與 50 μL trypan blue（or Erythrosinbluish）等體積混合均勻於 1.5 mL 小離心管中。
（2）取少許混合液（約 15 μL）自血球計數盤 chamber 上方凹槽加入，蓋上蓋玻片，於 100 倍倒立顯微鏡下觀察，活細胞不染色，死細胞則為藍色 (或紅色 Erythrosin bluish)。
（3）計數四個大方格之細胞總數，再除 4，乘以稀釋倍數 (至少乘以 2，因與 trypanblue 等體積混合)，最後乘以 10000，即為每 mL 中細胞懸浮液之細胞數。若細胞位於線上，只計上線與右線之細胞 (或計下線與左線之細胞)。
註：4 大格細胞總數×稀釋倍數×10000/4=細胞數/mL；每一大格的體積=0.1 cm×0.1 cm×0.01 cm=0.0001 mL 。
計數板計數時，最適濃度為 5～100000 細胞/mL，此範圍外計數誤差偏大。高濃度細胞懸液，可取出部分作稀釋或連續稀釋後計數。
T75 monolayer culture 製成 10 mL 細胞懸浮液，取 0.1 mL 溶液與 0.1 mL trypan blue 混合均勻於試管中，取少許混合液加入血球計數盤，計數四大方格內之細胞數目。
活細胞數/方格：55，62，49，59；死細胞數/方格：5，3，4，6；細胞總數=243 。
平均細胞數/方格=60.75；稀釋倍數=2
細胞數/mL：60.75×10000×2（稀釋倍數）=1.22×10000000
細胞數/flask（10 ml）：1.22×1000000×10 ml=12.2×10000000
存活率：225/243﹦92.6%
（1）計數板和蓋玻片擦拭好，綢布拭乾。
（2）充分混勻細胞懸液（細胞活力高時，不必用胎盤蘭染）。
（3）吸管取 1 滴至計數板：
（4）靜置半分鐘。
（5）在顯微鏡下觀察（10 × 物鏡），2 個以上細胞組成的細胞團按一個細胞計算，壓線的細胞只計上線和左線者（防止細胞被重複計數）。
4 大格 * 細胞總數 * 2 * 10000/4 = 細胞數/mL * 每一大格的體積 = 0.1 cm x 0.1 cm x 0.01 cm = 0.0001 mL
來源：生物學霸
本期編輯：Tony