微生物檢測過程中的一些問題及解答!

2020-12-19 騰訊網

1.食品微生物菌落總數的測定可以只做一個稀釋度嗎？

答：GB 4789.2要求每個樣品選擇2-3個適宜的稀釋度進行檢測。即使一個樣品已經基本可以確定了菌落數了，也建議多檢測一個稀釋度，多一個稀釋度也會對檢測結果進行驗證，只測一個稀釋度會存在風險。另外如果嚴格按照國標要求，這樣的檢測也是不符合要求的，某些要求嚴格的外審部門可能會對此開具不符合項。因此在檢測中還是應該嚴格按照國家標準執行。

2.菌落總數計數同一個稀釋度一個在計數範圍，一個不在計數範圍，怎麼計？

答：同一稀釋度的兩個平板，一個在計數範圍內，一個不在計數範圍內，則以在計數範圍內的平板的菌落數乘以稀釋倍數作為報告結果。舉例說明，某樣品檢測結果：10-1兩平板菌落數分別為320、288，10-2稀釋度兩平板菌落數為27、23，則樣品的檢測結果應選取288進行報告，報告結果為2.9*103CFU/g。

3.菌落總數檢測中，所有稀釋度菌落都多不可計，記錄結果怎麼寫？

答：GB4789.2-2016中要求：若所有稀釋度平板上菌落數均大於300CFU，則對稀釋度最高的平板進行計數，其他平板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。但是遇到這種問題也分兩種情況，若是平板上的菌落數可計但超過300CFU，可以按照國標要求進行；若平板上的菌落數過多，導致無法準確計數，建議對樣品進行複測，複測時可增加1-2個稀釋度。

4.做菌落總數檢測時，沒有菌落是怎麼回事？

答：首先，要確認下是不是樣品的問題，某些檢測樣品經過高溫殺菌之後，本身就沒有太多菌，所以沒有菌落也是正常的。其次，過程操作有沒有問題，比如用於檢測的稀釋液使用時是不是溫度太高，或者倒培養基時培養基溫度過高，亦或者培養基質量問題、培養箱溫度偏低等。最後，檢測時選擇的稀釋度過高，也可能導致沒有菌落生長。總之出現這種情況需要從各個方面進行分析。其實首先就應該確認樣品本身，很多檢測樣品檢測平板不長菌落也是正常的。

5.關於塗抹樣品的檢測，應當怎樣計數和報告？

答：塗抹樣品檢測的計數是比較複雜的，舉個例子說吧！假如你塗抹的樣品面積是25cm2，採樣的塗抹液是10mL，而檢測只吸取1mL樣液，即檢測的是原樣品的10-1的稀釋度，即平板計數菌落*10為樣品中的菌落數。結果報告就是菌落數/取樣面積。例如，取樣面積是25cm2，檢測平皿上計數為13，則結果報告應該為13*10CFU/25cm2，即130CFU/25cm2。

6.無菌水、生理鹽水、磷酸鹽緩衝液三者有什麼區別？

答：無菌水就是簡單的檢測水進行滅菌；生理鹽水是0.85%的NaCl水溶液；磷酸鹽緩衝液一般是選擇磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉按照一定比例配製的緩衝液。在食品微生物檢測中，三者最主要的區別在於對菌的保護作用。無菌水不存在對菌的保護，因為滲透壓的作用，還可能造成菌吸水脹裂死亡；生理鹽水的滲透壓基本與菌的細胞液相當，會對菌有一定的保護。磷酸鹽緩衝液除了在滲透壓方面對菌有保護作用，對pH也有一定的緩衝作用，因此對菌有更好的保護。國標要求，微生物檢測需要用生理鹽水或磷酸鹽緩衝液稀釋。但也有部分研究表明，檢測樣品若NaCl含量超過10%也可以使用無菌水稀釋，但並未被國家標準認可。

7.食品中致病菌的檢測必須在生物安全櫃裡進行嗎？

答：按照國家標準，實驗室只有在取得了二級生物安全實驗室或以上級別實驗室的認證的情況下才可以進行致病菌的檢測，並且致病菌的檢測必須是在生物安全櫃中進行。部分定性實驗的前增菌環節（如沙門氏菌的前增菌）理論上可以在超淨工作檯進行，但嚴格按照國家標準也是不符合要求的。

8.超淨工作檯需要定期測風速嗎？

答：建議進行。GB4789.1-2016中明確要求：實驗室設備應定期進行檢查和/或檢定、維護和保養，以確保工作性能和操作安全。因此超淨工作檯不僅應當定期檢測風速，也應定期清理過濾網，更換紫外燈等，具體頻次可根據實際情況自行決定。並且每次維護應當建立相應的記錄。

9.經過滅菌後的平板最長可以保存多少天，還是僅限當天使用？

答：滅菌後的平板最好當天使用。若是高壓蒸汽滅菌後的平板，應當進行烘乾，烘乾後的平板若當天有剩餘，可以放在無菌室內保存，儘量三天之內用完，建議超過七天進行重新滅菌。乾熱滅菌的平板也應如此。

10.培養基使用完之後，剩餘的培養基再次使用是否重新滅菌？

答：不可以。這分為兩種情況。第一種情況，已經凝固後重新融化後使用的，根據GB 4789.28-2013中明確規定，未用完的培養基不可重新凝固留待下次使用。遇到這種情況，培養基只能棄置，並且國標要求，棄置也需要符合相關法律法規的規定；第二種情況，首次滅菌後未用完的培養基，可待培養基凝固後再進行保存。但保存條件需避光乾燥，保證其成分不會發生改變。再次使用時按照要求進行融化即可，不可二次滅菌。首次滅菌已開封但未使用完的培養基，不建議再次使用，畢竟存在風險。但若是液體培養基，就不存在融化的過程，首次滅菌後未使用完畢可按照國標要求保存，使用時需要保證培養基成分不發生改變，不可進行二次滅菌。若無法保證培養基是否符合要求，應當棄置。

希望以上內容對您有所幫助！

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