Nat Protocols:科學家教你如何在檢測並且保存人類幹細胞?

2020-12-13 生物谷

圖片來源：pubs.acs.org

2016年2月1日 訊 /生物谷BIOON/ --人類幹細胞可以轉變成為任何類型的機體細胞，此前研究者很難獲得並且在實驗室中很難培養出人類幹細胞。近日，刊登在國際雜誌Nature Protocols的一項報告中，來自德國德爾布呂克分子醫學中心的科學家們通過研究開發了一種新型方法，其可以檢測細胞培養液中的多能細胞並且幫助科學家們在實驗室中對這種細胞進行保存。

研究人員Zsuzsanna Izsvak指出，我們的新型指導方案或可幫助全球的科學家們成功獲得這些夢寐以求的幹細胞，同時也可以幫助開發基於幹細胞的治療人類疾病的先驅性療法。研究者希望利用多能性的幹細胞在未來某一天治療多種人類疾病，而從理論上來講利用多能幹細胞可以培養出任何想要的組織類型。

相比較小鼠而言，在實驗室中從胚胎中移除的人類幹細胞會很快失去其最初的狀態，而在細胞培養液中原始的幹細胞組成比例低於5%，為此研究人員設計了一種新方法來分離這樣的幹細胞並且較長時間保持其多潛能狀態。早在2014年研究人員就在Nature雜誌上刊文闡述了這種方法的原理知識，而本文研究中他們將目光聚焦於研究名為HERVH的序列，該序列在原始幹細胞的遺傳物質中處於活化狀態；利用一種和螢光蛋白相關的報導子，研究人員就可以保持HERVH序列處於活化狀態，同時還可以檢測維持多潛能性的幹細胞。

最後研究者表示，這種新型方法不僅可以用於胚胎幹細胞，還可以用於誘導多能性幹細胞，目前誘導多能性幹細胞（iPS）在取代胚胎細胞上，從倫理學角度來講處於中立的角度，因為其是來自成熟機體的人工再生成熟細胞。（生物谷Bioon.com）

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Isolation and cultivation of naive-like human pluripotent stem cells based on HERVH expression

Jichang Wang, Manvendra Singh, Chuanbo Sun, Daniel Besser, Alessandro Prigione, Zoltán Ivics, Laurence D Hurst & Zsuzsanna Izsvák

The ability to derive and stably maintain ground-state human pluripotent stem cells (hPSCs) that resemble the cells seen in vivo in the inner cell mass has the potential to be an invaluable tool for researchers developing stem cell–based therapies. To date, derivation of human naive-like pluripotent stem cell lines has been limited to a small number of lineages, and their long-term culturing remains problematic. We describe a protocol for genetic and phenotypic tagging, selecting and maintaining naive-like hPSCs. We tag hPSCs by GFP, expressed by the long terminal repeat (LTR7) of HERVH endogenous retrovirus. This simple and efficient protocol has been reproduced with multiple hPSC lines, including embryonic and induced pluripotent stem cells, and it takes ~6 weeks. By using the reporter, homogeneous hPSC cultures can be derived, characterized and maintained for the long term by repeated re-sorting and re-plating steps. The HERVH-expressing cells have a similar, but nonidentical, expression pattern to other naive-like cells, suggesting that alternative pluripotent states might exist.

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