植物病毒RNA提取

2020-12-11 生物谷

植物病毒RNA提取

來源:來源網絡 2006-11-14 20:43

大多植物病毒RNA為單鏈RNA,並且其極性與mRNA極性相同,植物病毒RNA提取較為簡單,一般使用酚氯仿即可獲得滿意結果。
  一、材料
  提純TMV病毒液(10mg/ml)。
  二、設備
  冷凍臺式離心機,低溫真空乾燥儀,電泳儀,電泳槽。
  三、試劑
  TE-飽和酚:氯仿(1:1),氯仿,3M NaAc(pH5.2),乙醇(100%和70%),TE緩衝液,無RNA酶的雙菌水。
  四、操作步驟
  1、取一eppendorf管加入提純TMV(10mg/ml)400ml,再加入等體積酚/氯仿,蓋緊管蓋後用手充分振蕩1分鐘,4℃下12000g離心10分鐘。
  2、吸取水相於一新eppendorf管,再用酚/氯仿抽提,直至水相和有機相交界面無蛋白為止。
  3、吸取水相於新eppendorf心管,加入等體積氯仿,用手倒置離心管數十秒,4℃下12000g離心10分鐘。
  4、取水相,加入1/10倍體積的3mol/L NaAc(pH5.2),2.5倍體積的冰冷乙醇,混勻,-20℃30分鐘。
  5、4℃下12000g離心15分鐘,小心棄去上清液,用70%乙醇洗滌沉澱,4℃下12000g離心5分鐘。
  6、小心棄去上清液,沉澱真空乾燥5分鐘或空氣乾燥10分鐘,並溶於無RNA酶的雙菌水或TE緩衝液中。
  7、取10ml進行電泳分析,另10ml用於cDNA合成。
  [注意] 1、整個操作應儘可能在低溫下進行。
  2、由於病毒RNA鑲嵌於外殼蛋白裡面,因此要充分剝去病毒外殼蛋白,一般需要多次進行酚/氯仿的抽提。

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