微生物染色液配製及染色法

2.1　美藍染色法
2.1.1　呂氏鹼性美藍染色液
美藍　　　　　　　　　　　0.3g
95%乙醇　　　　　　　　　 30mL
0.01%氫氧化鉀溶液　　　　100mL
將美藍溶解於乙醇中，然後與氫氧化鉀溶液混合。
2.1.2　染色法
將塗片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1～3min，水洗，待幹，鏡檢。
2.1.3　結果
菌體呈藍色。

2.2　革蘭氏染色法
2.2.1　結晶紫染色液
結晶紫　　　　　　　　1g
95%乙醇　　　　　　　 20mL
1%草酸銨水溶液　　　　80mL
將結晶紫溶解於乙醇中，然後與草酸銨溶液混合。
2.2.2　革蘭氏碘液
碘　　　　　　　　　　1g
碘化鉀　　　　　　　　2g
蒸餾水　　　　　　　　300mL
將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解後，再加蒸餾水至300mL。
2.2.3　沙黃復染液
沙黃　　　　　　　　　 0.25g
95%乙醇　　　　　　　　10mL
蒸餾水　　　　　　　　 90mL
將沙黃溶解於乙醇中，然後用蒸餾水稀釋。
2.2.4　染色法
2.2.4.1　將塗片在火焰上固定，滴加結晶紫染色液，染1min，水洗。
2.2.4.2　滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗。
2.2.4.3　滴加95%乙醇脫色，約30s；或將乙醇滴滿整個塗片，立即傾去，再用乙醇滴滿整個塗片，脫色10s。
2.2.4.4　水洗，滴加復染液，復染1min。水洗，待幹，鏡檢。
2.2.5　結果
革蘭氏陽性菌呈紫色。革蘭氏陰性菌呈紅色。
註：亦可用1：10稀釋石炭酸復紅染色液作復染液，復染時間僅需10s。

2.3　耐酸性染色法(萎－倪二氏法)
2.3.1　石炭酸品紅染色液
鹼性品紅　　　　　　 0.3g
95%乙醇　　　　　　　10mL
5%酚水溶液　　　　　 90mL
將品紅溶解於乙醇中，然後與酚溶液混合。
2.3.2　3%鹽酸－乙醇
濃鹽酸　　　　　　　 3mL
95%乙醇　　　　　　　97mL
2.3.3　復染液
呂氏鹼性美藍染色液。
2.3.4　染色法
2.3.4.1　將塗片在火焰上加熱固定，滴加石炭酸品紅染色液，徐徐加熱至有蒸氣出現，但切 不可使沸騰。染液如因蒸發減少時，應隨時添加。染5min，傾去染液，水洗。
2.3.4.2　滴加鹽酸－乙醇脫色，直至無紅色脫落為止(所需時間視塗片厚薄而定，一般為1～3min)，水洗。
2.3.4.3　滴加呂氏鹼性美藍染色液，復染30s～1min，水洗，待幹，鏡檢。
2.3.5　結果：耐酸性細菌呈紅色，其他細菌、細胞等物質呈藍色。

2.4　柯氏染色法
2.4.1　染色液
2.4.1.1　0.5%沙黃液。
2.4.1.2　0.5%孔雀綠液。
2.4.2　染色法
2.4.2.1　將塗片在火焰上固定，滴加0.5%沙黃液，並加熱至出現氣泡，約2～3min，水洗。
2.4.2.2　滴加0.5%孔雀綠液，復染40～50s。水洗，待幹，鏡檢。
2.4.3　結果
布氏桿菌呈紅色，其他細菌及細胞呈綠色。

2.5　奧爾特氏莢膜染色法
2.5.1　染色液
沙黃　　　　　　　　　　 3g
蒸餾水　　　　　　　　　 100mL
用乳缽研磨溶解。
2.5.2　染色法
將塗片在火焰上固定，滴加染色液，並加熱至產生蒸氣後，繼續染3min。水洗，待幹，鏡檢。
2.5.3　結果
炭疽芽胞桿菌菌體呈赤褐色，莢膜呈黃色。

2.6　瑞氏染色法
2.6.1　染色液
瑞氏色素　　　　　0.1g
甲醇　　　　　　　60mL
用乳缽研磨溶解。
2.6.2　染色法
2.6.2.1　塗片待自然乾燥後，滴加染色液，固定1min。
2.6.2.2　加入等量蒸餾水(pH6.5)，染色3～5min。
2.6.2.3　用蒸餾水衝洗，待幹，鏡檢。

2.7　鞭毛染色法
2.7.1　染色液的配製
2.7.1.1　甲液：稱丹寧酸5g、氯化高鐵(FeCl3)1.5g，溶於100mL蒸餾水中，待溶解後加入1%的氫氧化鈉溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL。
2.7.1.2　乙液：稱2g硝酸銀溶於100mL蒸餾水中。
在90mL乙液中滴加濃氫氧化銨溶液，到出現沉澱後，再滴加使其變為澄清，然後用其餘10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出現輕微霧狀為止(此為關鍵性操作，應特別小心)。滴加氫氧化銨和用剩餘乙液回滴時，要邊滴邊充分搖蕩，染液當天配，當天使用，2～3d基本無效。
2.7.2　染色法
在風乾的載玻片上滴加甲液，4～6min後，用蒸餾水輕輕衝淨。再加乙液，緩緩加熱至冒汽，維持約半分鐘(加熱時注意勿使出現乾燥面)。在菌體多的部位可呈深褐色到黑色，停止加熱，用水衝淨，幹後鏡檢，菌體及鞭毛為深褐色到黑色。
2.8　鹼性復紅染色法
將0.5g鹼性復紅染料溶解於20mL95%乙醇中，然後用蒸餾水稀釋至100mL。如有不溶物時，可用濾紙過濾，或靜置後取上清液備用。
註：本染色液系用於蘇雲金芽胞內蛋白質毒素結晶的染色，藉以與蠟樣芽胞桿菌相區別