CellCountingKit，CCK-8試劑含有WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），是近年新開發的一種更新的水溶性四唑鹽檢測，原理與WST-1類似：在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原成具有高度水溶性的橙黃色甲臢產物（Formazan）。生成的甲臢物的數量與活細胞的數量成正比，用酶聯免疫分析儀測定其光吸收值可間接反映活細胞數量，在一定細胞數量範圍內甲臢形成的量與細胞數成正比。
圖1 CCK8檢測原理圖
1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養板放在培養箱中預培養（37℃,5%CO2）。
2、細胞處理（不同實驗處理方式不同）。
3、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。
4、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
5、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
6、若暫時不測定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，並遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。24小時內測定，吸光度不會發生變化。
由於CCK法靈敏度高，穩定性好，操作簡便，重複性好，且不需要放射性同位素和有機溶劑現已廣泛應用於多個領域，如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等。
1.根據所培養細胞的種類和細胞數量來確定細胞培養時間。細胞培養1-4小時後，可先從培養箱中取出，目測或使用酶標儀觀察染色程度，若染色不充分，再將細胞放入培養箱中繼續培養。
3.添加CCK-8試劑時，速度要快，避免藥劑在槍頭上停留時間過長，對藥物濃度產生影響。也可在加樣前用培養基稀釋CCK-8。
4.為增加檢測數據的準確，可以設定空白對照。在不含細胞的培養基中加入CCK8，培養一定的時間，測定450nm的吸光度即為空白對照。在做加藥實驗(細胞毒性實驗)時，還應考慮藥物的吸收，可在不含細胞，加入藥物的培養基中加入CCK8，培養一定的時間，測定450nm的吸光度作為空白對照。
5.CCK-8試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養基顏色接近，不注意的話容易產生漏加或多加。
6.OD值太低，可以採取2個辦法：①適當增加細胞數量。②延長加入CCK8試劑後的染色時間。
CCK-8檢測細胞增殖實驗的靈敏度比MTT、XTT及MTS更高，數據可靠，重複性好，操作簡便且無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞幾乎沒有毒性，尤其適合於懸浮細胞高通量藥物篩選。