導讀：
作為一名試驗猿，液相色譜自然是非常熟悉了，各種不同品牌不同功能的色譜儀那是跟相聲貫口《報菜名》一樣張嘴就來。
但是使用了那麼多年的液相色譜，還總是出問題，跟新手一樣，麼得有進步，到底是啥子問題嘛？
液相色譜使用過程中常見的幾個坑你入了幾個？
入坑一時爽，一直入坑一直爽！
很多小夥伴在做實驗的時候，雖然用的是等度，但也習慣性用泵在線混合然後就出現問題了。彈幕常說「虐妻一時爽，追妻火葬場」。嗯同理，偷懶一時爽，排查到想亡（死）。一起來看看由在線混合導致的問題吧。
基線有規律的波動
壓力線慘不忍睹
基線和壓力線配合的很完美就不讓你好好做實驗
泵不過液壓力為0
無獨有偶，這些小夥伴都是等度洗脫用泵在線混合，出現了以上問題。
為什麼等度洗脫不建議用泵在線混合流動相？
如果採用四元低壓泵混合，是通過比例閥切割流動相，在後續的管線和混合器中混合。各通道不同比例是通過開關各通道閥的時間來控制的。
舉個例子乙腈：緩衝鹽=50：50，如果流速是1.0mL/min，並不是說乙腈和緩衝鹽以各0.5mL/min的流速來混合；而是流速一直是1.0mL/min，但是兩個通道分別打開一半的時間，也就是說系統管道裡是一段乙腈、一段緩衝鹽。這樣就會造成鹽的析出。
所以，往往是兩通道混合，就算沒有用緩衝鹽，還是建議先按比例混合好了，然後走單通道。走梯度洗脫的話，往往會把有機相通道（B）中加入一定比例的水，或者把水相通道（A）配成梯度洗脫的初始比例，把有機相通道（B）配成梯度洗脫最終的比例。
四元低壓系統流路圖（部分）
即使是用高壓二元泵來混合，一個通道0.5ml/min乙腈，另一個通道是0.5ml/min的緩衝鹽，在混合器（3）位置混合，同樣會有鹽析而且混合器清洗維修不方便。
即使沒有緩衝鹽，兩項在混合時也可能產生氣泡，且此部分在脫氣機之後，如產生氣泡對系統造成不良影響，造成壓力波動，基線漂移，或泵不過液等問題。
綜上不管你用的是二元高壓還是四元低壓，等度洗脫儘量預混合後脫氣再上機使用。
二元高壓系統流路圖
二、使用高濃度的緩衝鹽卻不使用sealwash清洗柱塞密封
某大學老師說進樣總是有鬼峰，如上圖所示，壓力波動大，現場排查發現不僅壓力不穩定，U3000微滴計數器顯示可以看出柱塞密封漏液，溶劑瓶中的吸濾頭及單向閥芯肉眼可見異物，超聲清洗吸濾頭和單向閥芯，壓力波動問題解決，亦無鬼峰，基線較平穩，但柱塞密封依然滲漏。後期需更換單向閥芯及柱塞密封圈。嗯，又是一筆費用。長期使用高濃度的緩衝鹽流動相，卻不使用sealwash後密封清洗系統來清洗柱塞杆，導致柱塞杆及密封圈磨損漏液。
對於循環的sealwash系統如安捷倫液相，需定期更換後密封清洗液10%異丙醇。對於開放的sealwash系統如賽默飛U3000需注意清洗液的液位，避免清洗液流空。
坑是你入的，這鍋我不背。
有的小夥伴做的項目水相比例很高，總說柱子不好，壽命短，用一兩周柱效就不行了。之所以柱效下降是因為發生了疏水塌陷。
什麼是疏水塌陷呢？
當反相填料色譜柱使用接近100%的水為流動相時，有時會發生分離能力突然喪失即被分析物質保留明顯降低或完全不保留的現象，這就是疏水坍塌。此現象是由流動相不浸潤固定相表面而致。
碳長鏈(常見的有C18，C30）在有機相中是呈舒展的毛刷狀的，被測物色譜保留的作用力主要是和非級性的烷基長鏈的作用，所以含碳量高即烷基長鏈的C數和健合密度高，其色譜保留就強。但烷基長鏈長時間在水中,由於水的表面張力作用,會擠壓烷基長鏈使他們聚集或蜷縮於矽膠表面，其其表觀表面積大大減少，導致色譜無保留行為 。
目前常規的C18柱已經可以在95%左右的水相環境下正常使用而不發生疏水塌陷現象。純水中使用，則需要使用經過修飾改性的專用耐水柱進行分析。可勁吐槽C18色譜質量不行，為什麼不換一根耐純水的柱子呢。
舉個例子
CP2015藥典，做磷酸肌酸鈉流動相是純鹽相，用普通C18柱，柱子壽命短換AQ親水柱，壽命長多了。
色譜柱只用一次，峰形變成這樣，這鍋到底要不要背？是不是色譜柱質量問題？
嗯雖然只用了一次進了100多個樣品，但是柱壓從9.0升高到11.1Mpa
明顯柱子堵了，後期柱子小流速反衝壓力降低，這鍋甩出去吧，我不背。
如何延長色譜柱的使用壽命？這是一個老生常談的問題了。
比較簡單且容易做到的Tips
1、使用保護柱或在線過濾器（小粒徑柱子適用）
特別謹慎的實驗猿寶寶
2、高水相流動相臨用現配，尤其天氣炎熱，如需大量配置可配好後4℃冰箱冷藏。
3、流動相及樣品充分過濾
4、使用前閱讀說明書了解柱子的耐受PH及溫度等。
5、柱子使用完畢後按照說明書要求充分衝洗，參考短期封存和長期封存的方法，將色譜柱從液相色譜上取下妥善保存。
6、前處理做好，離心、過濾、過小柱，除澱粉除蛋白。
7、未完待續。。。。（還沒想好）
五、進完樣樣品不及時清理取出樣品倉（據說危害比較大）
一個做售後工程師的朋友前方發來戰報
進完樣品，沒有及時清理樣品倉的樣品瓶，說樣品倉中有濃濃的酸味。這不是不鏽鋼的嗎？樣品蒸汽有這麼大的腐蝕能力嗎？這個咱不知道，咱也不敢問。
但是要提醒一下，自動進樣器帶溫控功能的小夥伴們要注意一下樣品倉中的冷凝水，及時清理。
也是做售後工程師的朋友前線發回的消息：
1、小夥伴RSD總不合格各種排查問題，最後發現自動進樣器進樣針針尖卷了。嗯挺疼，換個真也不便宜。在使用自動進樣器時注意在更換不同的進樣小瓶或者內插管後及時調整進樣針高度，不要等咔嚓一聲瓶子碎了或者針彎了才想起來「哇偶！我忘了改針的高度了」
2、還有的小夥伴用了乙腈後不及時清洗系統，據這位朋友說大半年不衝，柱塞杆斷了，拆開泵頭，拿出柱塞杆時發現，嗯有白色聚合物特別黏，用的挺好。換對柱塞杆及密封圈吧。
3、有個小夥伴用的是島津LC20AT雙泵系統，某天開始工作之後，更換流動相打開purge閥，（中間去幹了些別的活）一陣忙亂之後回來關上purge閥準備平衡柱子，奇怪怎麼壓力是0，各種排查之後也沒找到原因，懷疑是不是泵驅壞了，報修工程師上門後把另一個泵的purge閥關上，開泵瞬間壓力上去了，好尷尬呀。
你在使用液相色譜時遇到了哪些坑，有沒有避免入坑的小妙招，歡迎留言分享你的訣竅和尷尬的操作瞬間，等你噢。
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