免疫組化實驗流程步驟：
免疫組化的標本主要是組織標本和細胞標本兩大類。組織標本中包括石蠟切片（標本製作的首選方法）和冰凍切片。一般而言，石蠟切片要求薄厚均勻，切片完整，且無褶無刀痕，相當考驗實驗人員的刀工，在此真心建議大家找專業公司進行切片，豐暉生物承接該業務。
1）脫蠟與水化：將石蠟切片放置於60°烤箱烤片30-60min，這一步是為了使蠟片水分蒸發和石蠟融化，好讓組織切片牢固地貼在玻片上。而後依次將其放入二甲苯I、II、III各10min，乙醇梯度（高至低：100%、95%、80%、70%）各2min，水洗5min（不要直接對著切片衝洗）。PBS洗3次，3 min/次。
2）細胞通透與封閉：用預熱的封閉通透液（40ml PBS+120ul TritonX-100+400ul 30%H2O2）浸潤切片30min（RT 避光），降低內源性過氧化物酶的活性。PBS洗3次，3 min/次。
3）抗原修復：由於製作石蠟切片時，甲醛固定使得蛋白之間交聯及醛基的封閉作用從而失去抗原性，這一步就是讓胞內的抗原決定簇重新「滿血復活」。
這裡常用微波修復，pH 6.0的0.01M檸檬酸鈉緩衝液浸泡切片，在微波爐裡高火4min至沸騰後，取出自然冷卻至室溫，重複2次，每次補足液體以免乾片。（當然有的朋友用酶修復法也是可以的）。PBS洗3次，3 min/次。
4）血清封閉：用與二抗同一來源的血清封閉一些非特異性結合位點。此時可用「祖傳」的油性筆圍繞組織畫圈，並對圈內的組織滴加稀釋好的血清，37℃溫箱中30min,用濾紙吸去多餘的血清。
5）孵育一抗：對圈內的組織（面積為1×1）滴加稀釋好的一抗20ul，4℃過夜或者37℃ 1-2h。PBS洗3次，3 min/次。（一般4℃過夜後，需要將切片放置37℃復溫45min，防止脫片以及可使抗原抗體結合的更穩定）
6）孵育二抗：對圈內的組織（面積為1×1）滴加稀釋好的二抗20ul，37℃ 1-2h，PBS洗3次，3 min/次。
7）切片顯色：用DAB-H2O2顯色10min，顯色液最好是現用現配，此時要通過顯微鏡觀察染色是否明顯，10min內即可用蒸餾水終止顯色。
8）復染及封片：為了形成細胞輪廓，更好的定位目標蛋白，可用Mayer蘇木素染色30s，水洗，鹽酸酒精分化2s，流水浸入15min。脫水時，乙醇梯度（由低至高：50%、70%、95%、100%）各2min。二甲苯5min使切片透明化，最後加入中性樹膠封片（一般封片後最好立即拍照，若不能及時拍照，可用指甲油封固並保持好避光和溼度）。
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