1. 多肽樣品在上製備柱前為什麼需要進行前處理？有哪些前處理的方法？
答：製備使用的色譜柱子因處理的樣品多，比用於分析色譜柱更容易受汙染，對需要過柱樣品進行一些前處理可以有效延長製備柱的使用壽命。
樣品的前處理主要方法有：萃取、過濾、離心、上預柱。
色譜柱2. 為什麼流動相中要加入三氟乙酸作為離子對試劑？還有哪些流動相體系或離子對試劑可用於多肽的分離純化？
答：昂拓萊司目前常用的流動相體系是水加乙腈，以三氟乙酸(TFA)為離子對試劑。根據不同多肽選擇合適的梯度洗脫分離多肽。
加入TFA能調節洗脫液的PH，同時作為離子對試劑與多肽會相互作用，能增強分離效果，明顯改善樣品峰形。
還可用於多肽分離純化的流動相體系或離子對試劑有：醋酸體系，磷酸體系，鹽酸體系，七氟丁酸等。通過調節PH同樣可以取得很好的分離效果。
3.如何選擇純化過程中使用的色譜柱填料？
答：不同的序列其多肽理化性質及疏水性有很大的不同。多數情況分子量<4000和親水性多肽用C18柱分離效果zui佳。
分子量 >5000和ji端疏水性的多肽以C4柱分離效果zui佳。
C8色譜柱介於C18和C4之間，他的應用效果偏向於C18；對一些特別選擇性的多肽，也可選擇苯基柱和聚合物色譜柱。
4. 在純化過程中選擇聚合物填料的原則是什麼？
答：需要使用溫度條件進行或高於正常pH純化時；可以使用pH範圍很寬的聚合物色譜柱。其優點是在ji端pH條件下不會降解，可以使用強酸與強鹼作為流動相進行分離純化。
5. 影響多肽純度檢測結果的因素
答：多肽純度檢測結果的影響因素很多，包括：流動相體系、色譜柱型號、柱溫、波長及色譜儀的性能指標，每一項不同都可能造成結果產生誤差。
6. 反相色譜分離純化後，怎樣去除產品中流動相產品中的TFA，乙腈等雜質？
答：凍幹的辦法應該可以除去大多數TFA和乙腈，只要不chao過允許範圍，這種辦法是簡單、有效的。對TFA含量要求更高的一些藥物肽凍幹的方法一般無法完全達到要求，需要進行專門的轉鹽或脫鹽。
7. 多肽一般有哪幾種鹽的形式？通過什麼方式轉鹽或脫鹽？
答：多數多肽都是在TFA體系下分離純化的，所以多肽以TFA鹽的形式zui多，其次藥物肽一般有醋酸鹽及鹽酸鹽的形式，少數yao物肽會有一些特別的鹽形式。轉鹽方式多為離子交換法和HPLC法，而脫鹽可用透析袋和chao濾膜。
8. TFA在緩衝液中是不是只起到調節PH的作用？TFA的濃度越高基線漂移越厲害，那是不是說TFA的濃度在緩衝液PH允許的情況下越低越好？
答：(1)TFA起到類似離子對的作用，一般濃度在0.05-0.1%，過高的濃度，會使溶液偏酸，長時間使用可能影響柱子壽命。
(2)同時TFA抑制矽膠表面矽醇基，可以改善鹼性樣品的峰型。有時0.1%TFA分離不理想。可以考慮把濃度加大到0.2%。但是要注意用完後及時衝洗色譜柱。
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