⚑ Matrigel是什麼，裡面包含哪些成分？
Matrigel是來源於EHS小鼠肉瘤的基底膜基質，其中含有約60%層粘連蛋白、30% IV 膠原和8%的巢蛋白，還含有基底膜聚糖、TGF-ß、表皮生長因子、類胰島素生長因子、組織纖溶酶原及其他生長因子。
⚑ Matrigel有哪些種類？
康寧Matrigel主要有常規標準型（Standard）、高濃度（HC）、無酚紅（Phenol red-free）、生長因子減量型（Growth factor reduced, GFR）和人胚胎幹細胞專用（hESC-qualified）幾個類別。
標準型Matrigel：濃度範圍大致為8-12mg/ml
高濃度Matrigel：濃度範圍大致為18-22mg/ml
無酚紅Matrigel：不含酚紅，產品完全融化後顏色透明
生長因子減量型Matrigel：Matrigel裡包含的生長因子經過減量處理
人胚胎幹細胞專用Matrigel：經過對hESC培養的測試，可以用於人胚胎幹細胞的培養
⚑ 如何選擇Matrigel？
⚑ Matrigel到貨需要注意什麼？
首先確認是否由乾冰運輸，到貨時包裝箱中乾冰是否足量，查看Matrigel液面是否基本水平，以及瓶身側壁、瓶口有無Matrigel融化的痕跡，以確保運輸質量；若發現問題，請及時拍照記錄，並聯繫經銷商反饋。
⚑ 如何儲存Matrigel？
收到產品並確認到貨情況無異常後，請將Matrigel儲存於-20℃冰箱，長期保存可置於-80℃冰箱。切勿將Matrigel儲存於自動除霜的冰箱中。在第一次融化後請分裝保存，應避免Matrigel反覆凍融。
⚑ Matrigel顏色為什麼會有不一樣？
無酚紅Matrigel沒有顏色，完全融化後應是透明的；
含酚紅Matrigel顏色可以在明黃色至暗紅色之間變化，這些顏色變化是正常現象。因為酚紅存在時，在溫度、pH不同的情況下液體會出現顏色的差異。
⚑ 怎麼融化Matrigel？Matrigel融化需要多長時間？
將整瓶Matrigel埋沒在碎冰盒中，再將冰盒置於4℃冰箱中，建議放在冰箱靠後的位置，放置過夜融化。確保碎冰足量。融化後轉動瓶子查看Matrigel是否全部融化，確認無冰晶或膠塊殘留。我們建議過夜融化，高蛋白濃度的Matrigel可能需要更多的時間。請勿將Matrigel瓶直接放在4℃冰箱中融化，也請勿將冰盒及Matrigel放置在冰箱門上或冰箱靠門的位置。以下圖片可供參考：
⚑ 融化後Matrigel應該是什麼樣的？
標準型Matrigel融化後應為澄清的液體，無酚紅的為澄清且透明；蛋白濃度越高，融化後液體越粘稠。具體請參考下圖Matrigel融化後的照片，左邊兩瓶是高濃度型，右邊兩瓶是標準型：
⚑ 如何分裝Matrigel？
建議根據您一次的使用量做小量分裝，。請注意與Matrigel接觸的所有耗材如槍頭、管子均需事先預冷，且在冰上無菌操作。分裝後的Matrigel可保存在-20℃或-80℃冰箱。建議保留瓶子的標籤或記錄下貨號（Catalog Number）及批次號（LOT number），以便後續查詢追蹤相關信息。
⚑ Matrigel融化時發現有凝膠，融化不了是怎麼回事？
Matrigel對溫度非常敏感，超過10℃即開始成膠，超過22℃成膠速度會更快。如果到貨情況正常，出現此種現象應該是融化操作不規範或者融化期間環境溫度升高導致部分凝膠。請一定嚴格按照融化操作規範執行，確保融化時保持低溫環境。
⚑ 如何稀釋Matrigel？
一般可用預冷的無血清培養基或pH7.4的PBS稀釋。由於批次之間的濃度差異，除354277外，推薦按照特定的工作終濃度稀釋，而不要以比例或稀釋倍數稀釋。
⚑ Matrigel濃度去哪兒查詢？
可以在康寧官網，輸入貨號，選擇quality certificate按鈕。或直接點擊網址：https://www.corning.com/asean/en/products/life-sciences/resource-library.html進入質檢證書查詢頁面，輸入貨號與批號，點擊查找，獲得相應COA文件。該文件中有蛋白濃度的說明；
對於幹細胞專用型Matrigel，COA中不包含濃度說明，僅以稀釋係數為實驗參照，如需了解具體濃度信息，請聯繫康寧技術支持。
⚑ Matrigel使用濃度？
凝膠濃度：在需要Matrigel凝膠的實驗中，工作濃度需大於3 mg/mL
包被濃度：包被實驗時Matrigel無需成膠，因此包被濃度應小於凝膠濃度（即3mg/mL）
工作濃度需要根據具體的細胞類型進行預實驗測試。對於侵襲實驗，建議初始濃度設置在200-300 μg/mL之間，再根據特定的實驗體系進行優化
血管生成實驗濃度：請務必使用大於10 mg/mL的Matrigel產品，康寧提供挑選批次和批次預留的服務，請您在訂購產品時向代理商說明您的要求
體內皮下注射實驗濃度：由於是體內實驗，為了避免成膠不完全，建議終濃度在4 mg/mL以上
⚑ 什麼是稀釋因子(Dilution Factor)？
對於幹細胞專用型Matrigel，其COA中不包含濃度說明，但是有稀釋因子說明。稀釋因子的數值也是批次特異性的，每個批次的稀釋因子是根據蛋白質濃度計算的。可以按照稀釋因子的數值來確定使用的量。比如某一批次的稀釋因子為238 μL，則可將238 μL的hESC-qualified Matrigel原液加入到25ml DMEM/F12中，混勻後可鋪4塊六孔板，每孔使用1ml Matrigel稀釋液進行包被。具體實驗步驟可見相應COA文件。
⚑ 使用Matrigel時需要注意哪些方面？
所有接觸Matrigel的試劑耗材產品都需要預冷，操作過程應全程在冰上操作，確保低溫環境。Matrigel對溫度十分敏感，一旦超過10℃，即開始凝膠。以下圖片可供參考：
⚑ 如何區別包被和凝膠？
包被指Matrigel濃度小於成膠濃度（即<3 mg/mL），在細胞培養器皿表面形成薄薄的蛋白層而不凝成膠凍狀物質；凝膠指Matrigel濃度大於等於成膠濃度（即≥3 mg/mL），在細胞培養器皿表面能夠形成膠凍狀物質
⚑ Matrigel凝膠鋪板使用量是多少？
薄膠（Thin Gel）：50μL/cm2，常應用於細胞附著和增殖；厚膠（Thick Gel）：150-200 μL/cm2，常應用於3D細胞培養；各培養器皿的有效培養面積請參考下表：
⚑ Matrigel包被後的培養器皿能存放多久？
包被過的培養器皿最好當天使用，具體情況取決於實驗目的。在需要保存的情況下，Matrigel包被之後的培養器皿可以於37 ℃恆溫箱或4 ℃冰箱中放置最長一周的時間。保存時培養表面需要保持溼潤，請勿將包被工作液從培養器皿中吸出。（稀釋後未用完的Matrigel不建議保留再用）。
⚑ 凝膠後的Matrigel能否融化後再使用？
Matrigel一旦成膠，是很難完全恢復的。可以嘗試將Matrigel埋在碎冰中，放入4℃冰箱，24-48小時後觀察能否融化。請注意，對於該處理方式後融化的Matrigel，其性能是無法保證的。
⚑ 如何從Matrigel中收穫細胞？
推薦使用康寧Dispase或Cell Recovery Solution 產品。Corning Dispase 相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液，不會損傷細胞或細胞表面蛋白。此外，Corning Dispase還可用於組織分離。對於代謝研究和RNA抽提，建議在4℃使用Corning Cell Recovery Solution進行非酶反應的細胞收穫，因為Corning Matrigel中含有痕量的RNA，進行RNA分析時，應設置僅含有Matrigel（不接種細胞）的陰性對照組。
⚑ 侵襲實驗中，Matrigel鋪板幾個小時，為什麼不會成膠？
在侵襲實驗中，使用Matrigel的目的是包被小室表面，形成一層基質蛋白薄膜來模擬細胞外基質，其使用濃度小於3mg/ml，沒有達到成膠濃度，是不會成膠的。
來源：corning生命科學
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