從前面的內容中，知道了串口外形，就可以繼續了解其每個引腳的定義，這是做線的基礎。無論是RS-232C、RS-422，還是RS-485，串口接口的外形、尺寸都是相同的，部件間可以通用互換，但其引腳的定義卻各不相同，因此要了解串口做線，首先要知道串口各引腳的定義。
觀察一個標準的串口，會發現串口無論是9針的標準串口物理外形（如圖3.4所示），還是25針串口物理外形（如圖3.6所示），如果橫著看，都顯示兩排引腳。除了兩排引腳這一特徵之外，還有就是無論是公頭，還是母頭，兩個引腳的外圍呈現一邊大、一邊小的「等腰梯形」的形狀（俗稱「D形」）。9針引腳中，大的一邊有5個引腳，小的一邊有4個引腳。
拆開串口接口，會發現在串口接口的內側，同樣有9個引腳，其形狀與外側布局相同，各引腳位置，也都存在一一對應的關係，如圖3.43所示。該引腳是用於焊接連線使用。當將該串口裝到機箱上後，由機箱外部看到的線序和從機箱內部看到的線序不一樣，考慮到本章將全面介紹串口的連接線的製作，二者的線序關係很重要，因而在做線章節中，專題討論這一問題，詳見第3.3.1.4 節。
本章除非專門說明，否則所有引腳線序都是指串口外側的線序，各引腳編號及意義如圖3.40所示。
根據圖3.40的引腳順序號，如果是作為RS-232C接口，則各引腳定義如表3.2所示。
表3.2 RS-232C引腳意義表
各引腳的電氣特性為：
在TxD和RxD上，邏輯「1」為-3V~-15V； 邏輯「0」為+3V~+15V。
在RTS、CTS、DSR、DTR和DCD等控制線上，信號有效為+3V~+15V；信號無效為-3V~-15V。
對於數據信號，邏輯「1」為低於-3V，邏輯「0」為高於+3V；對於控制信號，接通ON為低於-3V；斷開OFF為高於+3V；-3V~+3V、低於-15V、高於+15V都表示電壓無意義。
作為RS-232C接口，其各引腳由標準文檔進行定義，所以也可以稱為「標準引腳定義」。而作為RS-422和RS-485接口，則沒有「標準」引腳定義的說法，因為RS-422和RS-485連通常的標準接口也沒有，具體採用什麼接口，接口中使用哪些引腳，完全取決於設備設計生產商自己的定義。不過，作為RS-422和RS-485標準本身，定義了按照這兩個標準進行通信時，所必須提供的信號線，並且，實際的使用中，絕大多數廠商繼續使用標準的串口接口作為其通信的硬體接口，所以才有前面所說「RS-232C/422/485」採用相同的硬體接口的說法。
RS-422採用的是4線模式，具體設備的名稱與引腳定義由設備定義。表3.3是RS-422中各信號名稱，與表3.2不同的是，此表中「序號」與引腳沒有對應關係，只是表示一個流水號，在實際連線中，需要根據設備定義決定所在的引腳。
表3.3 RS-422引腳意義表
RS-485的信號有兩種，一種是4線模式，另一種是2線模式。4線模式中各信號名稱如表3.4所示。同表3.3一樣，表中「序號」也只表示一個流水號。
表3.4 RS-485的4線信號線名稱表
2線模式，其各信號名稱如表3.5所示。
表3.5 RS-485的2線信號線名稱表