一、透射式電子顯微鏡
根據加速電壓的大小分為:
一般(常規)TEM:100KV
高壓TEM:200KV
超高壓TEM:500Kv、1MV、3MV
一、常規透射電鏡(TEM)
1、原理:主要利用入射電子束穿過樣品,產生攜帶樣品橫截面內部的電子信號,並經多級磁透鏡的放大後成像於螢光板,整幅像同時成立。
2、特點:
⑴ 樣品超薄 h<1000 Å
⑵ 二維平面像、立體感差
⑶ 解析度高 ,優於2 Å
⑷樣品製備複雜
3、觀察對象:
主要樣品內部超微結構(可用來觀察組織和細胞內部的超微結構、微生物、生物大分子等)
二、超高壓透射電鏡(UHVEM:ultra-high voltage electronmicroscope)
HV<500kv為常規及高壓電鏡,一般TEM:100~200KV
HV>500kv為超高壓電鏡,Hvmax=1MV(法),3MV,15MV(美),10MV(日)
1、特點:
⑴穿透能力強、可觀察較厚的樣品 µm 級
⑵解析度高,2 Å(晶格解析度)
⑶單色性好,色差小,成像質量好
⑷加速電壓越高,散射截面越小,輻射損傷減小
⑸場深大,可獲取樣品的三維結構信息
⑹樣品室一般為環境樣品室,可觀察活體生物樣品
2、缺點:
體積龐大、結構複雜、價格昂貴、需專用的防護裝置
3、觀察對象:
主要研究非生物材料的晶格結構、觀察細胞骨架系統(微梁、微絲),人工培養細胞、血細胞等。
二、掃描式電鏡
依據性能不同主要分為:
(1)常規(一般)SEM
(2)環境掃描電鏡
(3)低壓掃描電鏡
(4)場發射電子槍SEM
(5)生物用SEM
(6)掃描電-聲電鏡
一、常規掃描電鏡(SEM)
1、原理:
利用電子束轟擊樣品表面,引起二次電子等信號的發射,主要利用SE並放大、傳遞SE所攜帶的信息,按時間序列逐點成像,顯像管上成像。
2、特點:
⑴ 圖象立體感強、可觀察一定厚度的樣
⑵ 樣品製備簡單,可觀察較大的樣
⑶ 解析度較高,30~40Å
⑷ 倍率連續可變,從4倍~~15萬
⑸ 可配附件,進行微區的定量、定性分析
3、觀察對象:
主要用於觀察樣品的表面形貌、割裂面結構,管腔內表面的結構等
二、環境掃描電鏡(ESEM)
1、特點:
① 多種真空狀態:高、低、超低真空
1Torr(乇)=1mmHg柱壓力=1/760標準大氣壓=133.3Pa
粗真空:760~10乇
低氣壓空間 低真空:10~10-3乇
高真空:10-3~10-8乇
超高真空:10-8乇以下
多種真空條件下可得SEI像、BEI像,且d =4nm
② 樣品室可充氣體:水氣、氮氣
③ 動態分析:樣品溫度從-185℃ ~1000℃
④ 制樣簡單:樣品無須鍍膜、脫水、乾燥等處理
真正的「環境」條件,可直接觀察含水、含油樣品
2、缺點:
造價太高 $30萬,Philips(FEI),解析度仍不很高
3、觀察對象:
活體生物、真菌、細菌、人工培養細胞等(含液體[水或油等]、以及不適合進行常規固定、脫水、乾燥等處理的樣品)如:ESEM最適宜觀察培養基上人工培養細胞的表面微觀結構。
三、低壓掃描電鏡(LVSEM: low voltage)
1、類型:
⑴ 高分辨型低壓掃描電鏡
⑵ 新型「減速」低壓掃描電鏡
2、特點
⑴ 加速電壓降低,增強反差
⑵ 試樣不易發生充放電效應,
⑶ Hv=2-3Kv時也可獲得1nm的解析度
3、觀察對象:
可觀察絕緣物質、生物樣品、半導體材料
四、場發射電子槍SEM
場發射電子槍SEM優點:
⑴ 場發射電子槍具有亮度高、能量分散少,陰極源尺寸小等優點, 其解析度已達到0.3-0.4nm。
⑵ 可在低加速電壓下進行高解析度觀察,因此可以直接觀察絕緣體而不發生充、放電現象。
五、生物用SEM
優點:
裝備有冰凍、冷熱樣品臺,可把含水生物樣品迅速冷凍並對冰凍樣品進行觀察,可以減少化學處理引起的人為變化,使觀察樣品更接近於自然狀態。
若要觀察內部結構,還可用冷刀把樣品進行切開,加溫使冰升華,並在其上噴鍍一層金屬再進行觀察,所有這些過程都在SEM中不破壞真空的狀態下進行。
六、掃描電-聲電鏡 SEAM
(ScanningElectron Acoustic Microscope)
成像原理基於樣品微熱學和彈性性質的變化建立圖像的,優點如下:
(一) 優點:
1. 電子束斑直徑小10nm,解析度高
2. 能交換顯示同一樣品的二次電子像和掃描電--聲像。
3. 能顯示樣品表面和亞表面不同層次的圖像,並且不破壞成像的剖面。
4. 節省費用,對現有的SEM稍加改裝即可一機兩用
比較振幅和相位的成像結果,可以區別表面和亞表面的結構差異。
(二)掃描電-聲顯微鏡的成像原理
(三) SEAM觀察的對象:
可以顯示樣品表面或表面下不同層次的微觀熱性質的差異,適宜檢測有晶格結構或有分層結構的金屬、陶瓷、半導體材料、有機介質等樣品,進行生物樣品表面和亞表面分析,進行晶體界面分析和亞表面無損分析。
如:生物組織、大分子結構的分層研究和檢測,組織損傷研究等。
三、掃描透射式電鏡(STEM)
工作原理介於TEM與SEM之間,兼顧SEM及TEM的優點、功能更強大、又彌補各自的缺點。
(一) 類型
1. 超高真空的場發射式STEM
使用場發射電子槍,單晶鎢針尖燈絲,可以獲得很高的亮度10-8-10-10A/cm2立體弧度,解析度0.3-0.5nm,真空度10-10torr,價格極高。
2.附件型STEM
附件附加在TEM或SEM上,解析度較低,TEM電鏡附件型解析度1-1.5nm; SEM電鏡附件型解析度4-6nm,附件型STEM主要用於X-ray能譜、波譜分析或電子損失譜分析,用以觀察元素分布圖
(二)、特點
⑴兼顧SEM及TEM的特點、功能強大、但造價高
⑵解析度不如TEM高,高分辨型0.3~0.5nm;附件型 1~1.5nm
⑶在200KV以上且超高真空時,照射面積小,熱損傷和輻射損傷小、汙染小,可以觀察到鈾和釷原子像
⑷能過檢測到掃描透射電子、透射電子和散射電子,並可同時觀察明場和暗場,可進行適當的處理和比較,獲取更多超微結構信息
⑸ 可觀察較厚樣品(0.2~0.4µm)和低反差樣品,圖像的反差和亮度易調節,切片可以不染色
⑹顯像方式:螢光板、顯像管
(三)、觀察對象:
觀察樣品表面、內部,獲取樣品的明場及暗場圖像
四、分析類電鏡
分析電鏡是利用電子束(射線)轟擊樣品所產生的X射線或俄歇電子等信號對樣品元素進行分析的一類電鏡。
其基本特點:
能在觀察超微結構的同時,對樣品中一個極微小的區域進行化學分析,從而在超微結構水平上測定各種細胞結構的化學成分及其變化規律。
(一) 分析電鏡的類型
(1)分析TEM:
也稱生物分析電鏡(BATEM:biologic analysis )TEM+EDS(or:WDS),解析度高d =1.5 Å 、分析性能好。目前很多100KV和 200KV TEM都可以裝上X射線檢測附件,進行樣品的元素分析。
(2)分析SEM:
在SEM上配備X射線能譜儀(或波譜儀)後,便可兼有電子探針分析樣品化學成分的功能。
(3)掃描俄歇電鏡:
把SEM與俄歇電子能量分析儀相結合,即成為掃描俄歇電鏡,它能對樣品表面進行微區元素分析,是一種表面微觀分析電鏡。
(二)分析電鏡的原理
AEM: analysis electron microscope )
連續X-ray 背底扣除
能量:Z 特徵X-ray的能量
特徵X-ray
波長: Z 特徵X-ray的波長
1、波譜儀(WDS)
Wavelength-disperse spectrometer
微區定量分析,4Be 92U 慢20~60分,靈敏度高
2、能譜儀(EDS)
Energy- disperse spectrometer
微區定性分析,11Na 92U 快2~3分,靈敏度低
波長與能量之間的關係:
特徵X射線的波長與加速電壓無關係,只與樣品的種類有關係。
分析電鏡中X射線顯微分析的理論依據:
特徵X-ray的波長和能量隨樣品中各元素的不同而異 ,可用於定量、定性分析Z↗激發的特徵X-ray能量E↗波長↘
即:只要是同一種原子,不論其所處的物理或化學狀態如何,它們所發出的特徵X射線均應具有相同的波長或能量。
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