內容來源：PharmaGMP
中國藥典對於雜質的限度檢測驗證的要求包括專屬性，檢測限和耐用性，相比較之前的鑑別測試的專屬性及耐用性，多了一個檢測限的要求。
同時，由於雜質的限度測試中，雜質的含量比例相對鑑別試驗是比較低的，所以在專屬性和耐用性方面的要求略有不同。
對於專屬性而言，雜質的限度測定最靠譜的方法毫無疑問是色譜法，在雜質可獲得的情況下，可以向試樣中加入一定量的雜質，重點考察雜質與主成分之間的分離度和檢出水平，同時，這種方法應該可以保證一定的準確度和精密度，尤其是準確度，中國藥典儘管沒有要求，但是USP中對於雜質限度測試的準確度的要求是視具體情況而定。
雜質或降低產物不可獲得的情況下，可以通過對含有雜質與降解產物的試樣，與另一個已經驗證的方法進行對比。這裡含有雜質的試樣對於API來說，有可能來自於前道沒有經過提純的工藝，或者是通過強光，高溫，高溼，酸鹼水解或氧化的方式獲得，同時對比破壞前後的雜質，必要時採用二級管陣列檢測器或質譜檢測器，進行峰純度的檢查。
檢測限則是指試樣中的被測物能夠被檢測出的最低量，藥品的雜質測定應通過測試確定方法的檢測限。
非儀器的目視檢查法可用已知濃度的被測物質，試驗出能可靠檢測出最低濃度或量的雜質水平；
對於儀器法，通常採用能顯示基線噪音的分析方法，將已知濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，計算出能被可靠檢測出的最低濃度或量，一般採用3：1或2：1的信噪比時相應的濃度做為檢測限。
接下來進行雜質定量測定的驗證要求的相關講解。
相比較限度測定幾個關鍵的參數指標專屬性、耐用性和檢測限而言，雜質的定量測定又多了精密度、準確度、定量限、線性、範圍的要求，可以說是各類方法驗證的類型中最為複雜的一種，這在各國或者機構的藥典中要求基本上都是類似的，詳細可參見下面的這張附件表格（來自GMP驗證指南）。
準確度是指被驗證的分析方法測量的結果與真實值或參考值之間接近的程度，一般用回收率表示。
對於雜質的定量測定而言，可採用以下三種方法：
1）向原料藥或者製劑中加入已知量雜質進行測定；通常試驗會設計三個不同的濃度80%、100%、120%，每個濃度製備3份供試品溶液，進行測定，計算回收率以及相對標準偏差；
2）如果不能得到雜質或降低產物，可用被驗證的方法測定的結果與其他方法進行比對；
3）在不能測得雜質或降解產物的響應因子或不能測得對原料藥的相對響應因子的情況下，可用原料藥的響應因子，應明確單個雜質和雜質總量相對於主成份的重量比或峰面積比。
精密度是指在規定的測試條件下，同一均勻供試品，經多次取樣測定所得結果之間的精密程度。
對於精密度的測試，有的時候容易會有一個誤區，認為對一個製備樣品重複進樣N次就可以考察分析方法的精密度，這其實只是確認了設備的精密度而已，從方法驗證的角度來看，方法精密度的驗證應該包括整個樣品的製備過程。
精密度的方法驗證又可以進一步細分為：
重複性：相同條件，同一人不同操作的結果精密度
中間精密度：同一實驗室，不同時間，不同人，用不同設備的結果之間的精密度
重現性：不同實驗室，不同分析人員測定結果之間的精密度。
精密度測試對於雜質定量以及含量測定兩大類定量方法而言，差別並不太大。
精密度與準確度是定量性質的方法驗證的最重要的兩個指標，兩者的關係可以參見下面的圖片：
定量限則與之前提到的檢測限多少有些類似，只不過雜質定量限所採用的信噪比一般為10：1時相應的濃度為結果來確定注入儀器的量確定定量限。
最後兩個指標，線性與範圍其實在某種程度上有一定的類似，接下來進行關於含量的方法驗證的相關講解。
雜質除了定量的要求之外，可能還會有限度檢查的要求，限度檢查從藥典的要求上來看，比雜質的定量測定要求的項目要少，包括專屬性、檢測限及耐用性。
與前文提到的雜質定量測定的要求類似，對於雜質限度檢查的專屬性而言，需要根據雜質是否可獲得分兩種場景進行考慮，比如最近沸沸揚揚的華海的纈沙坦事件中提到的微量雜質N-亞硝基二甲胺（NDMA），在這兩天報告中提到，NDMA暫定的每日最大攝入量參考限定值為0.1微克，相當於EMA暫定參考限定值0.3ppm（按每日服用320mg纈沙坦計算）就屬於這種雜質可獲得的場景。
雜質限度檢查中的雜質有很大的可能是工藝過程中引入，或者由於降解所產生，專屬性的要求是具有一定的分離度，必要時可採用二極體陣列檢測或質譜檢測器，進行峰純度的檢查。方法驗證的文件中如果採用的是色譜法，應附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，並應標明各個成份在色譜圖中的位置，色譜法的分離度應符合要求。
檢測限也有兩種方法，分別是：
1）非儀器分析的目視法：用已知濃度的被檢測物、試驗出能被可靠檢測出的最低濃度或量。經典的公式是L=CV/S，限度可以根據標準溶液的體積乘以濃度，再除以樣品量得到；
2）信噪比法：與定量限方法驗證的要求不同，檢測限要求的信噪比為3：1或者2：1，即已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品的信號比值應該通過方法驗證證明。
此外，還可以根據響應因子的標準偏差和斜率計算出檢測限，當校正曲線包含檢測限範圍的分析物濃度時，採用校正曲線的回歸線剩餘標準偏差或回歸線截距的標準偏差可以做為響應因子，3.3倍的響應因子除以校正曲線的斜率，可以做為檢測限。
檢測限方法驗證應該包括相應的測試過程的描述，附有相應的測試圖譜並且說明檢測限的結果，未來在制訂質量標準的時候，雜質的限度必然是大於檢測限的數值。