PAM範圍廣、高特異性和活性的工程化ScCas9

2020-12-09 科學網

PAM範圍廣、高特異性和活性的工程化ScCas9

作者：

小柯機器人

發布時間：2020/5/12 15:07:18

美國麻省理工學院Pranam Chatterjee研究團隊宣布他們研製了具有廣泛原間隔子相鄰基序（PAM）範圍、高特異性和活性的工程化ScCas9。該項研究成果在線發表在2020年5月11日的《自然-生物技術》上。

研究人員結合了多個直系同源物的蛋白質基序，工程化改造了犬鏈球菌Cas9的兩個變體-Sc ++和高保真度的突變型HiFi-Sc ++-使改造後的變體具有廣泛的5'-NNG-3'PAM相容性、強大的DNA切割活性和最小的脫靶效應。 Sc ++和HiFi-Sc ++擴展了CRISPR編輯在各種序列中的應用。

研究人員表示，CRISPR酶在靶切割位點附近需要一個PAM序列，這限制了可編輯的序列。

附：英文原文

Title: An engineered ScCas9 with broad PAM range and high specificity and activity

Author: Pranam Chatterjee, Noah Jakimo, Jooyoung Lee, Nadia Amrani, Toms Rodrguez, Sabrina R. T. Koseki, Emma Tysinger, Rui Qing, Shilei Hao, Erik J. Sontheimer, Joseph Jacobson

Issue&Volume: 2020-05-11

Abstract: CRISPR enzymes require a protospacer-adjacent motif (PAM) near the target cleavage site, constraining the sequences accessible for editing. In the present study, we combine protein motifs from several orthologs to engineer two variants of Streptococcus canis Cas9—Sc++ and a higher-fidelity mutant HiFi-Sc++—that have simultaneously broad 5′-NNG-3′ PAM compatibility, robust DNA-cleavage activity and minimal off-target activity. Sc++ and HiFi-Sc++ extend the use of CRISPR editing for diverse applications.

DOI: 10.1038/s41587-020-0517-0

Source: https://www.nature.com/articles/s41587-020-0517-0

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