名畫《蒙娜麗莎的微笑》誕生之後，關於蒙娜麗莎是誰？蒙娜麗莎又是因何而笑，千百年來一直備受世人的關注和猜測。不同的觀賞者在不同的時間，不同的角度去看，感受似乎都不相同，有時覺得她笑得舒暢溫柔，有時又顯得嚴肅，有時像是略含哀傷，有時甚至會顯出譏嘲和訝異。在一幅畫中光線的變化不能像在雕塑中產生那樣大的差別，但在蒙娜麗莎的臉上，微暗的陰影時隱時現，為他的雙眼與唇部披上了一層面紗，因此才會有這令人琢磨不定的神秘的微笑。
蒙娜麗莎的微笑美國馬裡蘭州的約瑟夫報考夫斯基博士，認為蒙娜麗莎壓根就沒有笑，他的面部表情很典型的說明，她想掩飾自己沒長門牙。法國裡昂的腦外科專家讓雅克孔代特博士認為，蒙娜麗莎剛得過一場中風，他半個臉的肌肉是鬆弛的，臉歪著，所以才顯得微笑。英國的醫生肯尼斯基友博士相信，蒙娜麗莎懷孕了！他的根據是她的臉上流露出滿意的表情，皮膚鮮嫩，雙手交叉著放在腹部。性學專家推測，王娜麗莎剛剛經歷了性高潮，所以才表現出令世人傾倒的微笑。
而關於蒙娜麗莎的原型也有不少種說法。其中有兩種比較有名的說法，第一種說法是左貢多夫人說，在關於蒙娜麗莎原型的討論當中最多的一種說法，認為其原型是佛羅倫斯富商，弗朗切斯科·吉奧貢多的的妻子。按照這種說法，達文西花了四年的時間，為這位名叫 麗莎·格拉爾蒂尼 的貴婦繪製了這幅畫像。格拉爾蒂尼生於公元1479年，在達文西繪製這幅畫時，她剛剛24歲，傳言中她還是一名叫莫迪西的紳士的情婦。第二種說法是斯福爾扎說。據泰晤士報報導，德國藝術史學家澤斯特在研究多年之後宣稱，蒙娜麗莎的原型其實就是義大利的傳奇女子斯福爾扎。
卡特琳娜斯福爾扎斯福爾扎在成為模特時剛剛25歲，她是米蘭公爵的私生女。在文藝復興時期的義大利，極具傳奇色彩，有悍婦之稱。公元1462年，15歲的她嫁給了教皇西克斯圖斯四世的侄子，聘禮是兩座城市。他的第一任丈夫情人與第二任丈夫先後被殺。公元1500年，斯福爾扎的家族在與博爾吉亞家族的爭鬥中失敗，在城破之後被囚禁了一年，被釋放八年之後，斯福爾扎去世了，享年46歲。第三種說法是妓女說。那不勒斯的卡羅維斯教授認為，畫中的蒙娜麗莎不是良家女子，而是那不勒斯的一名高級妓女。達文西正好捕捉到了一名職業誘惑者的微笑，或許這種說法有其可信之處，因為達文西在佛羅倫斯期間的確是各種風月場所的常客。
蒙娜麗莎是一個雌雄合體，這是達文西心目中人性最理想的結合方式。男人和女人平等地融合在一起，稍微玩一點變體的遊戲合在一起就變成了蒙娜麗莎。神秘的蒙娜麗莎，神秘的微笑，他究竟是誰？他究竟是在向誰微笑呢？種種的謎團只有等待更多的發現出現之後才能慢慢的揭開。