蒙娜麗莎的微笑是世界著名畫作，迄今為止世界上很少人不知道這幅肖像，但關於蒙娜麗莎的微笑之謎至今都是謎。有人說蒙娜麗莎的微笑看上去非常的詭異，還有人說她的微笑無論從哪個方向看都是在笑!甚至還有人認為她在哈哈大笑，關於蒙娜麗莎的微笑之謎至今都是未解之謎!
神秘詭異的微笑
說起蒙娜麗莎的微笑相信大家都不陌生，這是世界上最著名的畫作之一，可以說很少人不認識它。有人說蒙娜麗莎的微笑很詭異，不論是從哪個方向看她都在微笑，人們對這幅肖像的探討津津樂道，蒙娜麗莎的微笑之謎已經成為世界未解之謎，有人認為她的微笑跟視覺有關，還有人認為蒙娜麗莎更本就沒有笑，是她牙門的原因。
蒙娜麗莎的微笑之謎一直讓世人津津樂道，但是500年以來，人們一直對」蒙娜麗莎」的神秘微笑莫衷一是。從不同的觀者或在不同的時間去看，每一個人的感受似乎都會有所不同。有時覺得她笑得十分的舒暢溫柔，有時又顯得相當的嚴肅，有時像是略含哀傷，有時甚至也會顯出一絲譏嘲和揶揄。
在一幅畫當中，光線的變化不能像在雕塑當中產生那樣大的差別。但是在蒙娜麗莎的臉上，微暗的陰影也會時隱時現，而且還為她的雙眼與唇部披上了一層神秘的面紗。然而人的笑容主要表現在眼角和嘴角之上，達 芬奇卻偏把這些部位畫得若隱若現的，由於有十分明確的界線，因此才會有這令人捉摸不定的「神秘的微笑」。
荷蘭的阿姆斯特丹當中的一所大學應用「情感識別軟體」則分析出蒙娜麗莎的微笑之謎當中所包含的內容及比例：高興佔 83%，厭惡佔 9%，恐懼佔 6%，憤怒則佔 2%。哈佛大學的神經科專家瑪格麗特 利文斯通博士說，蒙娜麗莎的微笑則會時隱時現，但是它也與人體的視覺系統直接有關，而不是因為畫中人的表情有多麼的神秘莫測。
蒙娜麗莎的身份之謎
利文斯通博士是通過視覺神經活動方面的重要權威，主要所研究的眼睛與大腦對不同對比和光暗的一種極其強烈的反應。利文斯通說：「笑容經常會忽隱忽現，則是由於觀看者突然改變了眼睛的重要位置。」她表示，人類的眼睛內有兩個不同部分接收影像。中央部分(即視網膜上的淺窩)負責分辨顏色、細緻印記。環繞淺窩的外圍部分則留意黑白﹑動作和陰影。
據利文斯通說，當人們看著一張臉時，眼睛多數都集中在注視著對方的雙眼。假如人們的中央視覺放在蒙娜麗莎的雙眼，較不準確的外圍視覺便會落在她的嘴巴上。由於外圍視覺並不注重細微之處，無形中突出了顴骨部位的陰影。如此一來，笑容的弧度便顯得更加大了，蒙娜麗莎的微笑之謎是若隱若現的。不過，當眼睛直視蒙娜麗莎的嘴巴，中央視覺便不會看到陰影。利文斯通說：「如果看著她的嘴巴，便永遠無法捕捉她的笑容。」
蒙娜麗莎的身世之謎也是一個人們關注的重點內容，在德國的海德堡大學有人曾在歷史文件中找到一個線索，認為蒙娜麗莎就是一個義大利商人的妻子，而這個文件的作者正是與達文西相識的好友，還留有筆記說達文西在創作3幅作品之中就是商人妻子;而在2012年義大利的考古學家發現三具遺體與那個商人妻子死亡時間差不多，只要通過DNA檢查揭開蒙娜麗莎的真實身份了。
蒙娜麗莎的微笑之謎是一個難解的謎題，神秘的微笑至今都沒有被解答出來，又或許只是一個簡單的微笑被人們想複雜了也不一定，很多人對於蒙娜麗莎都有很多猜測，但卻都沒有看到作品本身呈現出來的內容。