人鐵調素Hepcidin酶聯免疫試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍： 96T
10μg/L -150μg/L
使用目的：
本試劑盒用於測定人血清、血漿及相關液體樣本中鐵調素Hepcidin 含量。
實驗原理
人鐵調素Hepcidin酶聯免疫試劑盒說明書本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人鐵調素Hepcidin 水平。用純化的人鐵調素
Hepcidin 抗體包被微孔板，製成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入鐵調素Hepcidin，
再與HRP 標記的鐵調素Hepcidin 抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物，經過徹底洗
滌後加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終
的黃色。顏色的深淺和樣品中的鐵調素Hepcidin 呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定
吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人鐵調素Hepcidin 濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（320μg/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1．標本採集後儘早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應儘快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放於-20℃保存，但應避免反覆凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
160μg/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
80μg/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
40μg/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
20μg/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
10μg/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加於酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒後棄去，如此
重複5 次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液後15 分鐘以內進行。
操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘後方可使用，酶標包被板開封後如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好
控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大於標準品孔第一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計
算時請最後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉汙染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月人鐵調素Hepcidin酶聯免疫試劑盒說明書
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