人煙醯胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)ELISA檢測試劑盒檢測原理試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人煙醯胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人煙醯胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液後，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。5. 保存：如果樣本收集後不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存於-20℃，避免反覆凍融，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1. 酶標儀（450nm）2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恆溫箱操作注意事項1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬於正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解後再使用。2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫乾燥）保存。3. 預處理後的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。5. 所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱 96孔配置 48孔配置 備註微孔酶標板 12孔×8條 12孔×4條 無標準品（400ug/L） 0.5mL 0.5mL 按說明書進行稀釋標準品稀釋液 6mL 3mL 按說明書進行稀釋樣本稀釋液 6mL 3mL 按說明書進行稀釋檢測抗體-HRP 6mL 3mL 無20×洗滌緩衝液 20mL 20mL 按說明書進行稀釋底物A 6mL 3mL 無底物B 6mL 3mL 無終止液 6mL 3mL 無封板膜 2張 2張 無說明書 1份 1份 無自封袋 1個 1個 無註：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：400、200、100、50、25、0ug/L.試劑的準備 20×洗滌緩衝液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水。洗板方法1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min後甩盡孔內液體，在吸水紙上拍幹，如此洗板5次。2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟1. 從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條，剩餘板條用自封袋密封放回4℃。2. 設置標準品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什麼都不加；標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；4. 隨後標準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體50μL，，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min。5. 棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）。6. 所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 所有孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。結果判斷 繪製標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪製出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。 試劑盒性能1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關係數R值，大於等於0.9200。2. 靈敏度：最低檢測濃度小於1.0 ug/L。3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4. 重複性：板內、板間變異係數均小於15%。5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6個月7. 檢測範圍：6.25ug/L-400ug/L免責聲明1. 試劑盒僅供研究使用，不得用於臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切後果，由實驗者承擔，本公司概不負責。2. 嚴格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，後果由實驗者承擔。
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