高效液相色譜法是藥物定量和定性分析中最常用的方法之一,但是在藥物中進行HPLC分析的前10個技巧中卻缺少其中的一些技巧可能會被證明過於複雜。這些提示除了推動錯誤的分析元素(例如溫度)外,還有助於優化分析過程。這些技巧包括了解HPLC分析的含義。在這種情況下,需要優化選擇性。
1.技巧一是避免嘗試重新發明輪子,這將導致大量實驗,從而浪費時間。取而代之的是,應該先查閱現有文獻,然後再確定合適的條件。此類文獻通常還包含有關最適合的HPLC分析,正相HPLC或反相HPLC的信息。
2.另一個提示是確定所需的樣品製備方法。樣品製備取決於溶解,預濃縮或過濾等,具體取決於優化特定樣品選擇性的製備。
3.正確選擇色譜方法對於獲得可靠的分析結果很重要。酸性和鹼性分析物應使用反相離子抑制器進行分析。對於中低極性,最合適的色譜類型是正相HPLC。另一方面,離子交換色譜最適合無機陰離子和陽離子。
4.複雜的樣品應使用梯度HPLC處理。在這種情況下,這是最合適的方法,因為它在複雜樣品中提供了更高的解析度和更高的峰數。同樣,梯度HPLC消除了在等度條件下容量範圍因素超出範圍的缺點。
5.列的大小應正確。除非是複雜樣品。色譜柱的尺寸應為10-15釐米,以填充3或5微米的填料。
6.在選擇檢測器時,應考慮樣品特性。這些特性包括發色團的存在,從而可以進行紫外線檢測。檢測限也應考慮在內。另一個考慮因素是必須進行化學衍生以提高靈敏度。
7.螢光和紫外線波長是優化工藝的重要參數。紫外線波長應設置為最大,而導致最大發射的螢光波長應參考現有文獻,或通過使用專家系統軟體和經驗方法來推導。
8.清潔度在色譜過程中至關重要。因此,應始終通過使用色譜柱保護裝置,過濾器樣品,過濾器緩衝的流動相,樣品淨化和適當衝洗來保持色譜柱清潔。
9.高峰問題是常見的現象,可能有多種原因。秘訣在於確定峰值問題的原因並加以解決,例如,流路中斷或床層裝填不足可能會導致殘留量增加的拖尾現象。
10.選擇最合適的高效液相色譜方法後,應遵循後續驗證過程以確保該過程的可靠性。此過程還應包括仔細檢查必要的程序和準備工作,通過這些程序和準備工作,觀察結果將獲得高度可靠的HPLC分析。