IPTG的誘導原理,以及有哪些作用?

2020-12-05 每日生物評論

IPTG(異丙基硫代半乳糖苷,Isopropyl β-D-Thiogalactoside):IPTG是β–半乳糖苷酶的活性誘導物質,是一種作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定,因此被實驗室廣泛應用。

誘導原理

(1)在原核蛋白表達體系中,如 E.coli的乳糖操縱子(元)含Z、Y及A三個結構基因,分別編碼半乳糖苷酶、滲透酶和乙醯基轉移酶,此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調控基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白(Lac阻遏物,不屬於乳糖操縱子),後者與O序列結合,使操縱子(元)受阻遏而處於關閉狀態。在啟動序列P上遊還有一個分解(代謝)物基因激活蛋白(CAP)結合位點。由P序列、O序列和CAP結合位點共同構成lac操縱子的調控區,三個酶的編碼基因即由同一調控區調節,實現基因產物的協調表達 。

(2)Lac 阻遏物是一種具有 4 個相同亞基的四級結構蛋白,都有一個與誘導劑結合的位點。 在沒有乳糖存在時,Lac操縱子(元)處於阻遏狀態。此時,I序列在PI啟動序列操縱下表達的Lac阻遏蛋白與O序列結合,阻礙RNA聚合酶與P序列結合,抑制轉錄啟動。當有乳糖存在時,Lac操縱子(元)即可被誘導。在這個操縱子(元)體系中,真正的誘導劑並非乳糖本身。乳糖進入細胞,經β-半乳糖苷酶催化,轉變為半乳糖——即生理上的誘導劑。後者作為一種誘導劑分子結合阻遏蛋白,使蛋白構象變化,導致阻遏蛋白與O序列解離、RNA 聚合酶不再受阻礙,啟動子P 開始發生轉錄,啟動反應開始發生轉錄。

乳糖操縱子結構基因

作用:

誘導外源基因的表達,普遍應用於原核表達系統,使其表達量增高,產物穩定,具有易鑑定,易純化的優點。在原核蛋白表達體系中,如 E.coli(大腸桿菌表達系統),外源基因通常需要誘導劑的誘導才能進行表達。

當pUC系列的載體DNA(或其他帶有LacZ基因載體DNA)以LacZ 缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體的載體DNA進行轉染時,如果在平板培養基中加入X–gal和IPTG,由於β–半乳糖苷酶的α–互補性,可以根據是否呈現白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑選出基因重組體。

此外,IPTG還可以作為具有Lac或Tac等啟動子表達載體的表達誘導物使用。

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