幾種常用染色法
革蘭氏染色法
[染色液]
結晶紫染液:結晶紫2.0克,酒精(95%) 20毫升。草酸銨0.8克,蒸餾水80毫升兩液混合即成。
革蘭氏碘液:碘片1克,碘化鉀2克,蒸餾水300毫升。
先將碘化鉀加於3-5毫升蒸餾水中,溶解後再加碘片,用力搖勻,待碘片完全溶解,再將蒸餾水加至足量。
酒精(95%):作脫色劑。
番紅(沙黃):復染液。
5%番紅純酒精溶液10毫升蒸餾水90毫升,二者混合即成。
[染色法]
首先塗片自然乾燥後,經火焰固定,用結晶紫染液染色1 ~2分鐘。水洗後加碘溶液於片上,固定1~2分鐘。再次水洗後用95%酒精脫色10-20秒。
第三次水洗後,以番紅復染1分鐘,水洗,以吸水紙吸乾,鏡檢。
注意點:
首先,塗片不宜過厚,過厚容易染成假陽性。其次,酒精脫色前,要把水甩盡,否則酒精中水分增多,脫色力加強,容易形成假陰性。最後,如用火焰固定塗片時,將塗面向上,通過火焰數次,以手接觸玻片,稍感燙手時即可。要防過熱,否則使細菌變形或影響染色反應。
[結果]
不被酒精脫色,染成藍紫色者為革蘭陽性菌;被酒精眯色,染成淡紅色者為革蘭陰性菌。
瑞特氏染色法
瑞特氏染色劑粉0.1克,中性甘油1毫升,中性甲醇60毫升。染色劑和甘油在乳缽裡充分研細後,加人甲醇使其溶解,經7天後,過濾,裝在中性的棕色瓶中,保存於暗處。
塗片自然乾燥,加染液染色1分鐘。最後,再加與染液等量的蒸餾水或自來水,使染液與水充分混合,經5分鐘後,水洗,吸乾,鏡檢。
[用途]
是血液、組織塗片的良好染色法。巴氏桿菌的兩極著色,炭疽桿菌或肺炎球菌的莢膜,皆可用此法染色。
姬姆薩氏染色法
姬姆薩氏染色劑粉0.5克,中性甘油33毫升,甲醇33毫升。將染色劑粉與甘油放入乳缽研磨片刻,加熱至60C使染色劑粉溶解再加人甲醇混合即成。
染色液與蒸餾水作1:10稀釋,配成稀釋的染液。塗片自然乾燥後,以甲醇固定3~5分鐘。
自然乾燥後,將塗片浸於盛有稀釋染液的染色缸內,染色半小時以上,然後水洗,吸乾,鏡檢。
[用途]
做血液、 組織塗片的染色。