什麼情況下,需要使用無酚紅Matrigel matrix?(關於Matrigel matrix的最強實驗解答的上篇)

2021-01-14 細胞之邦



1Matrigel matrix 的組成是什麼?

&答---

Matrigel matrix 是從富含胞外基質蛋白的 EHS 小鼠腫瘤中提取的基底膜基質,其中含有約 60%層粘連蛋白、30% IV 膠原和 8%的巢蛋白。康寧 Matrigel matrix 還含有基底膜聚糖、TGF-ß、表皮生長因子、類胰島素生長因子、組織纖溶酶原及其他生長因子。


2融化Matrigel matrix 需要多長時間?

&答---

需要放置於冰上,並在 2ºC-6ºC 的冰箱中或者冷室中過夜融化,蛋白濃度高時可能需要更多時間。


3使用Matrigel matrix 時需要預冷移液管和管子嗎?

&答---

是的。因為Matrigel matrix 在 10ºC 以上時會成膠,操作Matrigel matrix時,我們建議使用預冷的移液管、吸頭和管子。


4高濃度 Matrigel matrix 用於哪些實驗?

&答---

高濃度的 Matrigel matrix matrix 可適用於體內應用研究,如高濃度蛋白可促進腫瘤生長。高蛋白濃度同時可使Matrigel matrix 注射入小鼠皮下後保持完整,有利於注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子保持原位,便於用於原位分析和/或以後的切除。


5如何將Matrigel matrix 用於 3D 培養?怎樣製作 3D 膠?需要將細胞嵌入到Matrigel matrix 中嗎?

&答---

高濃度的 Matrigel matrix 可適用於體內應用研究,如製備厚層包被用於 3D 細胞培養。細胞可以嵌在Matrigel matrix 中或者接種在Matrigel matrix 表面(覆蓋法)。


6Matrigel® matrix的最低成膠濃度是多少?

&答---

不同的實驗目的需要不同的Matrigel濃度,用戶應該根據具體的實驗需求確定。Matrigel® matrix最低成膠濃度為 3 mg/mL。稀釋時不要簡單進行體積倍比稀釋,不同批次間的Matrigel濃度有差異,應該根據最終工作濃度 (mg/mL)算出需要加入的稀釋液體(如PBS或無血清培養基)的量。用於體內研究的Matrigel,為了避免成膠不完全,最終工作濃度不應低於 4 mg/mL。


7什麼情況下,需要使用無酚紅Matrigel matrix?

&答---

對於涉及顏色檢測的實驗,推薦使用無酚紅 Matrigel matrix,如使用螢光染料或 Drabkins 法計數內皮細胞成管實驗。對於子宮內膜細胞培養,也需使用無酚紅 Matrigel matrix。


此外,酚紅和非甾體雌激素結構類似,有類雌激素效應。在實驗動物體內可能具有幹擾內分泌和荷爾蒙代謝的能力。


8 Matrigel® matrix包被過的培養皿可以儲存多長時間呢?

&答---

包被過的培養皿最好當天使用,具體情況取決於實驗目的。需要保存的情況下,可在37°C培養箱中最多存放7天。保存時Matrigel表面需要使用無血清培養基均勻覆蓋,保持溼潤。


9 哪些情況下應該選用薄膠?什麼時候用厚膠呢? 3D培養有哪些應用?

&答---

薄膠主要用於輔助細胞貼壁,有利於細胞增殖。如原代細胞培養,需要一層薄薄的蛋白層輔助,就可以選用薄膠;厚膠主要用於3D細胞培養,如大鼠主動脈組織分化為毛細血管樣結構(Ring Assay),以及進行細胞侵襲實驗等;3D細胞培養實驗,主要是用於研究細胞與細胞間的相互作用以及複雜結構,如生物組織等。


10 進行內皮管形成實驗,應該選用多大濃度的Matrigel呢?

&答---

進行該實驗,Matrigel最低濃度應不低於10mg/mL。


11 做細胞侵襲實驗,需要使用多少 Matrigel® matrix進行包被?

&答---

包被24孔通透性支持物,推薦每孔使用0.1 mL (濃度200-300 μg/mL)。


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