高效液相色譜儀的使用和原理分析

2020-12-05 王丹鋒

高效液相色譜儀的使用

高效液相色譜法只要求樣品能製成溶液,不受樣品揮發性的限制,流動相可選擇的範圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量範圍的物質。

與試樣預處理技術相配合,HPLC 所達到的高解析度和高靈敏度,使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能,能夠分離複雜相體中的微量成分。隨著固定相的發展,有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離。

HPLC成為解決生化分析問題最有前途的方法。由於HPLC具有高解析度、高靈敏度、速度快、色譜柱可反覆利用,流出組分易收集等優點,因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。

液相色譜- 質譜聯用技術受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等; 液相色譜- 紅外光譜聯用也發展很快,如在環境汙染分析測定水中的烴類,海水中的不揮發烴類,使環境汙染分析得到新的發展。

實驗室圖片

高效液相色譜儀的原理

分配係數與組分、流動相和固定相的熱力學性質有關,也與溫度、壓力有關。在不同的色譜分離機制中,K有不同的概念:吸附色譜法為吸附係數,離子交換色譜法為選擇性係數 (或稱交換係數),凝膠色譜法為滲透參數。但一般情況可用分配係數來表示。

在條件(流動相、固定相、溫度和壓力等)一定, 樣品濃度很低時(Cs、Cm很小)時,K只取決於組分的性質,而與濃度無關。這只是理想狀態下的色譜條件,在這種條件下,得到的色譜峰為正常峰;在許多情況下,隨著濃度的增大,K減小,這時色譜峰為拖尾峰;而有時隨著溶質濃度增大,K也增大,這時色譜峰為前延峰。因此,只有儘可能減少進樣量,使組分在柱內濃度降低,K恆定時,才能獲得正常峰。

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