PCR實驗室建設要求及防控建議

2020-12-04 哈爾濱肯夫實驗室設備

聚合酶鏈鎖反應,Polymerase chain reaction,簡稱PCR,是一種分子生物學技術,用於擴增特定的DNA片段,這種方法可在生物體外 進行,不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。PCR這項技術,被廣泛地運用在醫學和生物學的實驗室,例如用於判斷檢體中是否會表現 某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因複製,以及親子鑑定。

(一)PCR實驗室平面布局

PCR實驗室原則上分為4個單獨的工作區域,由擴增前區到擴增後區,且要嚴格分開。實驗材料、試劑、記錄筆、紙、清潔材料等,只能從擴增前區流向擴增後區,即從試劑製備區--樣品製備區---擴增區---擴增產物分析區,不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區流動到擴增後區,不得逆向流動。各工作區域應設置緩衝間,工作間與緩衝間之間宜安裝聯鎖裝置。不同功能的核酸檢驗工作區應是分隔獨立的工作室,並有明顯的標誌,各區間不能直通。各區之間如果是緊密相連,需安裝物品 傳遞窗。每個工作區域的頂部應安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm。

實驗室較為理想的布局模式為有一個專用走廊,試劑製備區,樣品製備區,擴增區和產物分析區很規範的排列在一起。內實驗室區域設為正壓或常壓狀態,緩衝間內設為負壓狀態,使這三個區的空氣流向由實驗區域內向外,緩衝間內通向內實驗室和走廊的門可安一種聯鎖裝置,當一個門打開時,另一門必須關閉狀態,防止出現兩個門同時打開的情況。

(二)各區的功能及主要設備

試劑製備區主要是擴增試劑的配製,分裝盒保存。主要設備有天平、冰箱、離心機、加樣器、紫外燈。樣品製備區主要是樣品的混樣和測試樣品的製備。主要設備有冰箱、生物安全櫃、離心機、加樣器、振蕩器、恆溫水浴、上下水設備、廢棄物容器、紫外燈。根據製備樣品的性質和要求決定操作臺是用生物安全櫃、淨化工作檯、還是排毒櫃,如疾控中心、臨床醫學實驗室一般選用生物安全櫃,植物轉基因、檢疫等可選排毒櫃。擴增區是pcr擴增反應體系的配製和模板的加入,核酸擴增。加樣應在生物安全櫃(超淨工作檯)內進行,超淨工作檯的氣流方向宜選擇垂直式。核酸擴增設備為冰箱、生物安全櫃、離心機加樣器、廢棄物容器、紫外燈。擴增產物分析區是擴增產物的測定。若實驗僅採用全自動擴增檢測儀,可將 區與擴增產物分析區合併為一個區。本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。(三)實驗室空調通風系統設計及壓力控制各個區域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免實驗室之間的相互幹擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成汙染產生假性結果。PCR實驗室並沒有嚴格的淨化要求,但是為了避免各個實驗區域間交叉汙染的可能性,宜採用全送排的氣流組織形式。

(四)實驗室裝修

實驗室的牆體,包括頂棚,應結構牢固、氣密性好;所有陰角宜採用弧形線條過濾;牆體內壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒;地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。地面建議使用PVC卷材地面或自流平地面,整體性好,便於進行清掃,耐腐蝕。

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