【細胞培養】DMEM 和RMPI1640的不同
2021-01-18 知凡生物DMEM 和RMPI1640的不同，可以互相換用嗎?
DMEM培養液：
DMEM是在最低必需培養基(Eagle"s minimum essential medium MEM）的基礎上發展而來的，分高糖型（含葡萄糖4500mg/L）和低糖型(含葡萄糖1000mg/L)兩種，高糖型適用於生長較快，附著性較差的腫瘤細胞，例如雜交瘤中骨髓瘤細胞，DNA轉染的轉化細胞等的培養。
RPMI 1640 培養液：
RPMI 1640 培養液最初為培養小鼠白血病細胞而製備。開始的配方特別適合懸浮細胞的生長，主要針對淋巴細胞，後經過幾次改良從RPMI 1630、RPMI 1634，而至RPMI 1640。其組成較為簡單，但可以適應很多種類細胞的生長。是目前應用最為廣泛的培養基之一。
幾點建議，供參考：
(1)建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞首選的培養基。可以查閱參考文獻，或在購買細胞株時諮詢。
(2) 其它實驗室慣用的培養基不妨一試，許多培養基可以適合多種細胞。
(3) 根據細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養基。如小鼠細胞株多選 RPMI1640 。
(4) 用多種培養基培養目的細胞，觀察其生長狀態，可以用生長曲線、集落形成率等指標判斷，根據實驗結果選擇最佳培養基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。
當然也可以一部分細胞用DMEM養，一部分用1640養，如果用1640沒問題，再換也不遲。有些細胞對培養基的類型要求不嚴格，有時候剛好1640用完了，用DMEM養也無大礙。
檢測細胞汙染，尋找緣由，對症下藥是關鍵。
一、細菌汙染
狀態：
細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據感染細菌的不同，可有不同的外形，培養液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。
解決方法：
1.仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間和壓力足夠！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次汙染的話有可能造成儲存液汙染，一定要檢查培養液是否存在渾濁現象！
2.可在培養液或血清中加Paebacl™ Rid（桿菌去除劑）或 Bacteria™ Rid（細胞除菌劑）。
說明：Bacteria™Rid特別針對細胞出現耐藥細菌汙染，有效替換並超越雙抗的一款細胞除菌試劑
1.1 桿菌汙染
狀態：
桿菌，呈杆狀，革蘭氏染色陽性、陰性或可變，以周生鞭毛運動。當細胞出現桿菌汙染，會在顯微鏡下看到一些杆狀遊動的小蟲子。
桿菌圖片
解決方法：
a. 發現細胞有桿菌汙染，棄掉培養基，用pbs清洗3遍；
b. 然後按1:1000 比例加入Paebacl™ Rid 試劑，即：邊加邊搖勻；
c. 每天處理一次，Paebacl™ Rid 連續處理3-4天，即可完全清除桿菌汙染。
除以上汙染源外，配液消毒問題、操作問題也是汙染原因之一。關於培養基的無菌狀況，取培養基至培養瓶中（不加細胞），37℃試培養一段時間後觀察，如果沒有細菌生長就是操作及細胞培養箱環境的問題。
1.2 球菌汙染
狀態：
球菌呈球形或近似球形，其大小以細胞直徑來表示，一般為0.5~1.0μm。由於球菌分裂面的不同，根據繁殖以後的狀態，常見球菌汙染：肺炎雙球菌、鏈球菌、金黃色葡萄球菌等。
解決方法：
a. 發現細胞有球菌汙染，棄掉培養基，用pbs清洗3-5遍；
b. 然後按1:1000 比例加入Bacteria™ Rid 試劑，即：邊加邊搖勻；
c. 每天處理一次，Bacteria™ Rid 連續處理3-5天，即可完全清除球菌汙染。
Tips:球菌汙染的細胞
除以上汙染源外，配液消毒問題、操作問題也是汙染原因之一。關於培養基的無菌狀況，取培養基至培養瓶中（不加細胞），37℃試培養一段時間後觀察，如果沒有細菌生長就是操作及細胞培養箱環境的問題。
二、真菌汙染
狀態：
肉眼觀察培養基，發現培養基顏色基本無變化，不渾濁，但是培養基中由絮狀漂浮物，顯微鏡下觀察，若感染真菌可看到分叉細絲狀的結構（不同種類結構不同），若感染黴菌，顯微鏡下可看到片狀的結構，不透明，真菌及黴菌對影響細胞的生長影響不大。
念珠菌汙染的細胞
解決方法：
1.保證細胞房的乾淨整潔，乾燥的環境(潮溼的環境利於黴菌及真菌的生長)。
2.控制外來人員進出實驗室。
3.對實驗室及培養箱進行徹底消毒，推薦使用專門針對細胞培養環境的Zoftic™系列抑菌劑。
4.若細胞非常珍貴，且不易獲得，可以對汙染的細胞採取如下操作。
懸浮細胞：收集細胞並離心，用PBS漂洗，重複此操作數次。貼壁細胞：用PBS輕輕衝洗細胞，重複此操作數次。加入Candida™ Rid殺滅真菌，清除細胞中存在的念珠菌汙染。
三、支原體感染
狀態：
顯微鏡下很難捕捉，培養液一般不會渾濁，國內血清很多沒做支原體陰性檢測，而支原體是血清中最常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以後，細胞病變不很明顯，只是生長緩慢，直至慢慢死去。
支原體汙染的細胞
解決方法：
>>預防：實驗室新購買的血清及培養基需檢測是否含有支原體，引進的新品種細胞需做支原體檢測（推薦使用MycoTest™ Kit支原體檢測試劑盒），向培養基中添加PreNocard™ Rid-支原體預防劑，預防細胞支原體汙染。
>>補救：將 Nocard™ Rid 支原體去除劑與完全培養液按1:1000-2000比例稀釋，加入細胞正常培養；根據細胞汙染的嚴重程度，處理3～6次即可完全清除細胞支原體汙染問題。
四、黑膠蟲汙染
狀態：
可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍鏡下可看見黑色的小蟲遊來遊去，培養液不渾濁，一般不會太影響，細胞還可以用。常常可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。
↑ 仔細看，在動哦!
解決方法：
Nabact™ Rid-黑膠蟲去除劑，1:500-800比例加到培養液中。血清凍融採取逐級凍融等方法。
PreNabact™ Rid-黑膠蟲預防劑，1:1000加到細胞培養液中，正常細胞培養，用於預防黑膠蟲汙染。
TIPs：細胞操作及細胞培養箱環境問題如何解決？
1、提高細胞操作技巧，禁止交叉使用槍頭，在酒精燈火焰5公分距離內操作。
2、定期對細胞培養箱消毒，培養箱水盤中的水也要定期更換，並使用無菌水。
3、進入細胞房之前及在無菌操作臺操作細胞實驗之前需使用紫外燈照射30min。定期使用ZoFtic™ 細胞房除菌劑對細胞房空間進行處理。
4、每次開培養箱之前需用酒精消毒雙手。
5、用ZoFtic™培養箱除菌劑和ZoFtic™水盤抑菌劑定期對培養箱進行消毒。
6、配製的培養基需驗證無菌後方可進行細胞培養。
聯繫方式：
南京知凡生物技術有限公司
Tel：025-68027363
QQ：3114303786
E-mail：sales@zfdows.com
Web：www.zfdows.com
相關焦點
-
DMEM培養基配置方法
一、配製DMEM血清培養基 1.提前一天將分裝好的FBS從—20℃冰箱取出，放於4℃冰箱化凍； 2.在細胞間中將FBS以及其它需要添加的成分（如，丙酮酸鈉、抗生素等），按照比例加入DMEM培養基中，作好標籤；放入4℃冰箱保存。 -
【培養基時間】回歸基礎培養基→ DMEM還是RPMI?
—關鍵是以貼壁細胞培養的MEM（DMEM）和懸浮細胞培養的RPMI為開始。 -
DMEM基礎培養基應用方法及操作注意事項
DMEM 基礎培養基是最常用的一種Basal Medium Eagle(BME)基礎培養基的改良型，含較豐富的營養成份，包括四倍濃度的胺基酸和維生素，同時含有甘氨酸，絲氨酸及硝酸亞鐵。最初的配方主要用於鼠胚胎細胞的培養，目前用於多種動物細胞的生長。高壓滅菌型是該培養基的熱穩定配方，可保證其營養成份在高壓高熱中不受影響。 -
培養細胞的形態觀察和計數
【實驗目的】了解培養中的動物細胞的一般形態和生長狀態；掌握細胞計數的基本方法。【實驗用品】一、材料和標本 培養中的 HeLa 細胞(人子宮頸癌上皮細胞)、NIH3T3(小鼠成纖維細胞)、HL60 細胞(人白血病細胞)二、器材和儀器 倒置顯微鏡、細胞計數板、普通光學顯微鏡、乳頭吸管三、試劑 0.3％臺盼蘭染液、0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA 混合消化液【實驗內容】一、培養細胞的形態觀察 -
康寧生命科學:3D細胞培養和2D細胞培養的區別
我們將首先探討3D細胞培養和2D細胞培養的區別。自1907年，美國生物學家及解剖學家Ross Harrison第一次成功進行了2D（二維）動物細胞培養，2D細胞培養模型在發育生物學、組織形態學、疾病機制、藥物研發、大規模蛋白生產、組織工程和再生醫學領域的發展發揮了重要作用。 -
哺乳動物細胞培養過程 & 培養條件
傳代培養會根據具體情況分為細胞株培養和細胞系培養。：從動物機體取出組織後切碎，經過各種酶（常用胰蛋白酶），螯合劑（常用EDTA）結合機械方法（吸液管反覆吸吹）處理，分散成單細胞，置於合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖。 -
動物細胞培養的培養基_鄭大中科博生
動物血清是細胞培養中用量最大的天然成分.含有豐寓的營養物質，能促進細胞的生長繁殖，同時對細胞的貼壁和保護右明顯作用.合成培芥基模擬天然培養基的成分，其中的組成物質成分明確，補充部分天然培養基後（通常星血清）能使細胞很好地生長和繁殖。合成培芥基可根據實驗目的，調節各種成分的比例，設計出許多種培養基。中科博生。 -
細胞技術 細胞培養試劑 冷凍和復甦
細胞培養基 市場上可提供乾粉培養基和液體培養基： 乾粉培養基需使用者自己配製並滅菌，其優點是價格便宜。再加青黴素和鏈黴素至終濃度各為100 U/ml。 ↓ 細胞培養液 血清 熱滅活：56℃, 30 分鐘加熱已完全解凍的血清 熱滅活目的：滅活血清中的補體成分。如果不做細胞因子和免疫相關的實驗，建議血清不要滅活。因為熱處理會造成血清沉澱物顯著增多，還會影響血清的質量。滅活後嚴重影響細胞生長速度，且細胞貼壁率降低。 -
【細胞培養】細胞系293和293T的簡介
細胞名稱293 和 293T種屬人組織來源293細胞是轉染腺病毒E1A基因的人腎上皮細胞系，293T細胞由293細胞派生，同時表達SV40大T抗原，含有SV40複製起始點與啟動子區的質粒可以複製。生長特性粘附文獻評價293細胞系是原代人胚腎細胞轉染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化細胞。[RF32725] 表達轉染的腺病毒5的基因。[RF32725] 早期報導認為此細胞含有Ad 5基因組左端和右端[RF32764]，現已清楚僅含有左端序列。[RF50113] 此細胞系人腺病毒滴度高。 -
如何培養細胞?這套細胞培養新手入門指南送給你
什麼是細胞培養？細胞培養（cell culture）是指在體外模擬體內環境（無菌、適宜溫度、酸鹼度和一定營養條件等），使之生存、生長、繁殖並維持主要結構和功能的一種方法。細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。 -
細胞培養的步驟和注意事項
加入DMEM完全培養基，輕輕吹打混勻，製成細胞懸液，接種於培養皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養箱中培養。當細胞密度達到80%~90%（過早產量不足，過晚細胞狀態不佳，1:2至1:10以上的比率傳代培養，一般1:3至1:5細胞一代，即從細胞接種到分離再培養的一段時間，非細胞有絲分裂次數）時，去掉完全培養基，用1X PBS清洗2次。 -
根據其作用不同,培養基分為誘導培養基、增殖培養基和生根培養基
營養豐富，在一般培養中，無需加入複雜的有機成分:微量元素種類全，濃度高。這類培養基是目前使用最廣泛的培養基。鉀鹽、銨鹽及硝酸鹽含量較高，微量元素種類齊全，比例適當，離子平衡性好，具有較強的緩衝性，養分數量及比例比較合適，廣泛用於植物的器官、花葯、細胞及原生質體的培養。 -
細胞是如何培養出來的
不少人在醫院有過這樣的經歷，醫生說準確的診斷需要細胞培養，一般這項檢查都需要好幾天，不明就裡的人肯定特別好奇，這細胞怎麼培養呢？是如何培養出來的呢？下面是我們的實驗員培養細胞的心得體會，大家從中可以了解一下細胞培養的背後。一養細胞深似海，從此自由是路人。 -
培養SW620細胞-空氣培養基是必須的嗎?
人直腸腺癌細胞SW620是廣大科研者最常用的直腸癌細胞模型之一。ATCC上SW620細胞的培養體系是L15+10%FBS,L15就是俗稱的空氣培養基，因為不同於通常的氣相5% CO2，L15培養基的氣相是100%空氣。 -
全面解讀細胞培養基!
2）促生長因子及激素：針對不同細胞添加不同的生長因子。激素也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質，有些激素是許多細胞必不可少的，如胰島素。3）酶抑制劑：培養貼壁生長的細胞，需要用胰酶消化傳代，在無血清培養基中需含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達到保護細胞的目的。最常用的是大豆胰酶抑制劑。4）結合蛋白和轉運蛋白：常見如轉鐵蛋白和牛血清白蛋白。 -
獨家珍藏|細胞培養攻略,了解這些細胞培養變得更簡單!
每一細胞株均有其特定使用且已適應的細胞培養基，若驟然使用和原先提供培養條件不同的培養基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活。不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源，所以血清的種類和品質對於細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。 -
動物細胞培養及外源基因導入的原理和方法
體外培養的細胞可採用顯微鏡，電鏡等直接觀察記錄，充分滿足實驗的要求。另外還具有研究範圍比較廣泛，研究費用相對經濟等優點。然而，細胞培養也有其局限性。由於培養的細胞脫離了機體複雜的環境條件，其細胞形態和功能都會發生一定程度的改變。尤其是體外反覆傳代、長期培養的細胞，有可能發生染色體非二倍體改變等情況。 -
細胞培養實驗室的環境設計
細胞培養室和設計原則是防止微生物汙染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新、乾燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養於一室，而洗刷消毒在另一室。 （2）培養瓶：根據培養細胞種類要求不同培養瓶的形態各異，用於細胞傳代培養的細胞要求瓶壁厚簿均勻，便於細胞貼壁生長和觀察，瓶口要大小一致，口徑一般不小於1cm，允許吸管伸入瓶內任何部位，規格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等幾種。 （3）培養皿：用於開放式培養及其它用途。 -
細胞培養板的選擇和使用(二)
細胞培養板的密閉和汙染問題細胞培養板的加樣和操作：細胞培養板在進行細胞操作時同樣遵循嚴格無菌的原則，各項操作要保證規範、科學，不對細胞的生長造成額外的影響。這其中最常見的問題就是如何保證加樣後細胞的均勻和儘量減少換液對細胞生長狀態的影響。 問：96，24孔培養板或培養皿的蓋子都很鬆，這樣是方便了透氣，但是細菌、黴菌等汙染物會不會也隨著溜進去呢？ -
細胞培養操作流程
一般標準的細胞培養室應包括配液室、準備室和培養室。三室既相互連接又相對獨立，各自完成培養過程中的不同操作。【實驗目的】①了解培養室的設置和設備。②學習無菌概念和無菌操作要領。不同物品其有效滅菌壓力和時間不同。⑤儲品櫃1：放置未消毒物品。⑥儲品櫃2：放置已消毒物品。⑦包裝臺：滅菌前的包裝用。準備室注意事項：①預防蒸餾器被烤乾。②放置水池中的水滲出。③勿將酸液濺到衣物或地面。④勿將高壓鍋排氣閥和安全閥堵塞。