移液器使用與維護標準操作規程
1.目的:確保移液的精確性,正確使用移液器。保證移液器加量的準確性。
2.適用範圍:本實驗室使用的可調式移液器。
3.負責人:
4.移液器的使用:
4.1設定容量值:a.根據所需取液量選擇相應的加樣器;可調式加樣器應在允許的範圍內yxq調節;連續可調式加樣器容量讀數由三位撥號數字組成(顯示所轉移液體容量),讀數時從上(最大有效數字)到下(最小有效數字)讀取,利用底部刻度可將容量調節到更精確度的分度。b.轉動加樣器的調節旋鈕,反時針yxq方向轉動旋鈕,可提高設定移液量;順時針方向轉動旋鈕,可降低設定移液量。用調節旋鈕設定容量比較方便。在調整旋鈕時,不要用力過猛,並應注意使移液器顯示的數值不超過其可調範圍。c.本室所使用Finnpipette加樣器是連續可調、計量和移液的專用儀器。加樣器有各種不同的型號,推桿上F左下角yxq數字區間為加樣器最小—最大容量值,容量範圍自0.5ul至500ul(各種型號容量範圍見下行括號內)。 (0.5—10ul) (10-50 ul) (5—50ul) (20—200ul) (50-250 ul) (100—500ul)
4.2吸液和放液:首先選擇一支合適的吸管安放在加樣器套筒上。稍加扭轉壓緊吸頭使之與套筒間無空氣間隙。未裝吸管的加樣器絕不可用來吸取任何液體。最常用的吸液和放液方式有兩種。
4.2.1前進式:a.吸液:把按扭壓至第一停位點;垂直握持加樣器,使吸管頭浸入液面以下1cm深度然後緩慢、平穩地鬆開按鈕吸入液樣,待移液器吸滿液體後等一秒鐘,然後將吸管頭提離液面,貼壁停留2-3秒,使管尖外側的液滴滑落。b.放液:將吸頭口貼到容器內壁並保持10°~40°yxq傾斜。平穩地把按鈕壓到第一停點,放出液體,等1-2秒鐘後再把按鈕壓到第二停點以排出剩餘液體。壓住按鈕,停頓1-2秒,提起加樣器,使吸頭貼容器壁擦過。鬆開按鈕。按吸管推頂杆去除吸管。此種加樣方式適合加樣本時使用。
4.2.2倒退式:a.吸液:把按扭壓至第二停點;垂直握持加樣器,使吸頭浸入液樣中,然後緩慢平穩地鬆開按鈕吸入液樣,吸滿液體後,將吸頭撤出液面,貼壁停留2-3秒,使管尖滴滑落。b.放液:將吸頭口貼到容器內壁並保持10°~40°傾斜。平穩地yxq把按鈕壓到第一停點,放出 預設定液體。遺留在管嘴尖的液體隨吸嘴一起扔掉或按至第二點壓回到原來液體管中。c.此種方式適用於高粘度液體;易起泡沫的液體或極小量的液體
4.2.3 重複操作法:重複操作移液法可以快速、簡便地重複轉移同體積的同種液體。a.將操作按鈕向下壓至第二停點位置。b.將移液管管嘴浸入液面下2~3mm深處,然後慢慢鬆開按鈕吸入液體。待移入管嘴吸滿液體後,將管嘴貼在容器瓶壁上防止形成液滴滴入瓶中。c.輕輕壓下操作按鈕至第一停點位置,放出液體。待放完所需體積液體後,把按鈕停在第一停點位置,不包括在移液量之內的少量yxq液體仍留在管嘴內,管嘴外的液滴則需包括在移液量之內。d.重複步驟b.和c .繼續移液操作,就可重複轉移相同體積液體。
4.3預洗:a.當取液體積大於10ul時,為了保證吸液的精確度和準確性,在裝上一個新吸嘴(或改變吸取的容量值)後應預洗吸嘴,即先吸入一次液樣並將之排回原容器中,反覆2-3次。預洗新吸頭能有效提高移液的精確度和重現性。這是因為第一次吸取的液體會在吸嘴內壁形成液膜,導致計量誤差。而同一吸嘴在連續操作時液膜相對保持不變,故第二次吸液時誤差即可消除。 b.而當yxq液體體積小於10ul,只有在沒有預洗,同時要將吸取的液體在要轉入的液體中反覆吸打幾次,排空液體,再將吸嘴提出並貼壁停留1-2秒,才能保證取液的精確度和準確性。
4.4緻密及粘稠液體:吸取或排放血清或粘稠液體時,宜在第一點多等一兩秒鐘再壓到第二點。
4.5加樣器吸頭:加樣的準確性與精密度與加樣器的吸嘴的質量也密切相關,吸嘴的選擇也至關重要。基因擴增實驗因為要使用大量的吸嘴,並有許多微量操作,因此在選擇時應注意以下幾點:a.生產過程純淨,符合當今無染料物質的要求(避免汙染)。b.形狀(密封良好的環口、薄壁和嘴口尖細)使安裝或卸脫更加容易、管壁有彈性、不會產生漩渦,從而精度更高。c.嘴口決無毛刺。吸嘴表面光潔平滑,沾溼性極小,避免液體留外壁引起的誤差。dyxq.每個嘴口上都有模具編號,確保品質跟蹤系統。e.吸嘴與吸嘴套筒密封完好,防止空氣洩漏造成精度或準確度的誤差。f.有液體容量刻度線,這樣吸液量不夠可以及時發現。g.可在121℃下消毒20分鐘。h.應選用帶慮芯的吸頭,以避免樣品與樣品、樣品與加樣器或樣品與操作人員的汙染。
4.6故障排除:a.發現漏氣或計量不準,其可能原因和解決方法為:①套筒鬆動?用手擰緊螺帽。②套筒括花或破裂?卸下彈射器,檢查套筒。③活塞或密封受化學腐蝕?更換活塞或密封圈。用蒸餾水洗滌套內壁b.發現套筒內有液體可依下法清潔:卸下彈射器,擰下螺帽並用蒸餾水洗滌套筒、活塞、密封圈及O形環,待完全乾燥後重新組裝。c.需要時,雷勃加樣器的吸管部分及套筒、螺帽和彈射器在121℃及1巴壓力下消毒20分鐘。注意密封圈及O形環不能高溫消毒。d.發現吸液時有氣泡:先將液體排回原容器,檢查吸嘴浸入是否合適,再更慢地吸取液體;如仍有氣泡應更換吸嘴。
4.7凡是更換了活塞或操縱杆的加樣器需進行全面調校。
4.8加樣器使用注意事項:
4.8.1根據所需取液量選擇相應的移液器及吸嘴,基因擴增實驗要求使用帶慮心的吸嘴,防止汙染。
4.8.2取液時應緩慢勻速吸取,避免液體淺到移液器頭yxq上;打出液體後拇指不應鬆開按鈕,將吸嘴壓掉後再將拇指鬆開,避免液體回吸。4.8.3調整取液量的按鈕時,不要用力過猛,並應注意計數器顯示的數值不要超過其可調範圍。
4.8.4連續可調移液器在取樣加樣過中應注意移液嘴不能觸及其它物品,以免被汙染。吸頭盒(架子)、廢液瓶、所取試劑及移液的標本管應擺放合理,以方便操作過程、避免汙染為原則。
4.8.5連續可調移液器在使用完畢後應置於移液器架上,遠離潮溼及腐蝕性物品。連續可調移液器不可在無吸嘴時使用,吸嘴有液體時不能平放或倒置。以防液體進入移液器套筒內。4.8.6在取液之前,所取液體應在室溫(15-250C)平衡;液體溫度與室溫有異時,將吸嘴預洗多次再用;移液溫度不得超過700C。
4.8.7操作時要慢和穩,吸嘴浸入液體深度要合適,吸液過程儘量保持不變;改吸不同的液體、樣本或試劑前要更換新吸嘴;發現吸嘴內有殘液時必須更換;新吸嘴使用前應先預洗。
4.8.8為防止液體進入移液器套筒內,應注意以下幾點:壓放按鈕時保持平穩;移液器不得倒轉;吸嘴有液體時不得平放。
4.8.9切勿用油脂等潤滑活塞或密封圈。
4.8.10不可把容量調到超過其適用範圍。
4.8.11使用了酸或有腐蝕性蒸汽的溶液後,最好拆下套筒,用蒸餾水清洗活塞及密封圈。
4.9移液器的維護:每次對使用前後的移液器用75%酒精進行擦拭。每周1次對移液器咀進行75%酒精浸泡15分鐘左右,若使yxq用過程中發生汙染應隨時浸泡處理。如有液體進入加樣器內造成汙染,可以將加樣器拆開後進行清潔。各區加樣器具有各區的標識,清潔時分別對待。
4.10移液器的校準:為確保移液器加樣的精確性和準確性,正確使用移液器,需定期(半年)對移液器進行校準,由設備科人yxq員送到當地計量部門進行校正,並保存好校正記錄和校正移液器的編號。
5.本標準操作程序的變動程序:可由任一使用本SOP的工作人員提出,並報經下述人員批准籤字:室技術負責人,檢驗科主任。