革蘭染色的操作步驟是檢驗專業事業單位面試考試中經常出現的考點，是臨床中最常用的染色方法之一，答題的思路與技巧同樣也是按照口述實操類的題目進行作答，分三部分：操作前準備、具體操作步驟以及操作注意事項。下面山東中公教育針對革蘭染色進行講解以及知識點整理，方便大家更好的記憶。
染色目的：判斷細菌為革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。
原理：通過結晶紫初染和碘液媒染後，在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫和碘液的複合物，革蘭陽性菌因其細胞壁較厚，肽聚糖網層次較多且交聯緻密，故欲乙醇脫色處理時，因失水反而使網孔縮小，再加上它不含類脂，故乙醇處理不會出現縫隙，結晶紫與碘的複合物仍然存在於細胞壁內，使其仍呈紫色;在革蘭陰性細菌中中，乙醇處理不但破壞了胞壁外膜，還可能損傷肽聚糖層和細胞質膜，於是被乙醇溶解的結晶紫和碘的複合物從細胞中滲漏出來，當再用襯託的染色液復染時，顯現紅色。
一、操作前準備
滅菌玻片、生理鹽水、菌落、接種環、酒精燈、革蘭染液、香柏油、顯微鏡
二、操作步驟
1.製片和固定：取生理鹽水一滴，置玻片上，用接種環挑取菌落，將細菌放在生理鹽水內研勻成薄的菌膜後，自然乾燥，並經火焰固定。
2.初染：加草酸銨結晶紫1-2滴，使染液覆蓋塗片約一分鐘，用細水流衝洗。
3.媒染：滴加碘液衝去殘水，並覆蓋約一分鐘，染色約1min，用細水流衝洗。
4.脫色：將載玻片上的水甩淨，並襯以白背景，用95%酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止，約20-30秒，立即用水衝淨酒精。
5.復染：在塗片薄膜上滴加1-2滴沙皇，使染液覆蓋塗片，1min後水洗。
6.鏡檢：乾燥後，置油鏡觀察。革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽性菌呈紫色。
三、注意事項
1.塗片不宜太厚，在塗片時細菌挑的太多，沒法分開，在脫色時就不能將第一步染上的結晶紫的顏色脫去，可能會使革蘭陰性菌也出現紫色，誤認為革蘭陽性菌。
2.脫色時間嚴格按照說明書上的時間進行。
3.一定要記得固定，固定方法為：將乾燥後的細菌塗片以中等速度通過火焰三次，以玻片觸及手背皮膚熱而不燙為宜。
註：本站稿件未經許可不得轉載，轉載請保留出處及源文件地址。
(責任編輯：offsdcs05)
免責聲明：本站所提供試題均來源於網友提供或網絡搜集，由本站編輯整理，僅供個人研究、交流學習使用，不涉及商業盈利目的。如涉及版權問題，請聯繫本站管理員予以更改或刪除。