水中微生物DNA提取試劑盒，樣本製備步驟

德國MB的試劑盒採用0.4μm濾膜截獲微生物，然後微生物被加入到濾膜上的離子活性劑和促溶劑裂解。隨後進行DNA抽提。本文締一生物為您分析水中微生物DNA提取試劑盒，樣本製備步驟。

水中微生物DNA提取試劑盒，樣本製備步驟

步驟1. 樣本過濾

1.1 從試劑盒中小心取出濾膜。用水樣潤溼濾膜。

1.2 將濾膜放置在濾器中，並過濾必要體積的水樣。

步驟2. 菌體裂解

* 提前準備：預先將恆溫儀設置到70℃，將恆溫箱設置到37℃。

2.1將樣本過濾後的濾膜翻轉放置到試劑盒提供的IncubationDish（平皿）中。

2.2 吸取2mllysis buffer（裂解液），並加到濾膜上。

2.3 將濾膜浸泡在裂解液中，小心搖勻平皿並在37°C孵育30分鐘。

2.4 用平皿中的裂解液衝洗濾膜，並搖晃平皿10秒鐘。

2.5 將平皿中的400μl裂解液轉移至IncubationTube（孵育管），70°C孵育10分鐘。

2.5a可選項：剩餘裂解液可再取400μl用於DNA抽提，以獲得更多的DNA樣本。

2.6 樣本短暫離心，並加入400μl Binding Buffer（結合液），立即渦旋充分混勻，以防止DNA沉澱。請勿離心樣本，並立即進行下一步。

步驟3. DNA提取

* 提前準備：

（1）WashBuffer 1（洗液1）和WashBuffer 2（洗液2）第一次使用前，用無水乙醇復溶（請參見瓶上標籤）

（2）將恆溫儀設置到70℃，並將ElutionBuffer（洗脫液）放在上面預熱。

3.1 將步驟2.6中的混合液（~800μl）轉移到CollectionTube（收集管）內的SpinColumn（離心柱）中，小心液體不要沾到離心柱的邊緣。

3.2 離心柱離心≥10000× g，1分鐘。棄掉收集管中的液體。重新將離心柱插到原有的收集管中。

3.2a 可選擇：在步驟2.5a中，多取的一份樣本重複以上操作，不用換離心柱。

3.3 離心柱中加入500μl洗液1。離心≥10000×g，1分鐘。棄掉收集管中的液體。重新將離心柱插到原有的收集管中。

3.4 離心柱中加入500μl洗液2。離心≥10000×g，1分鐘。棄掉收集管中的液體。將離心柱插到一個新的收集管中。

3.5 最大速度離心3分鐘，以去除殘留的洗液2。

3.6 棄掉收集管。將離心柱插入到試劑盒提供的SampleStorage Tube（樣本保存管）中。

3.7 吸取60μl已70℃預熱的洗脫液，直接加到離心柱的矽膠膜上。矽膠膜表面應全部覆蓋洗脫液。

3.8 室溫靜置2分鐘，然後離心8000×g，2分鐘，以洗脫DNA。

3.9 樣本保存管中的洗脫液即包含DNA，可直接用於PCR，或儲存在2~8℃，可存放1周。長期儲存是在≤-18℃。