牛細小病毒（CPV）ELISA檢測說明書
本試劑盒僅供研究使用。 96T
使用目的 ：
本試劑盒用於測定牛血清,血漿及相關液體樣本中細小病毒（CPV）表達。
實驗原理 ：
本試劑盒採用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中牛細小病毒（CPV） 。用純
化的牛細小病毒（CPV）抗體包被微孔板，製成固相抗體，可與樣品中細小病毒（CPV）抗
原相結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分後再與 HRP 標記的細小病毒（CPV）抗體
結合，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物，經過徹底洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP
酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測
定吸光度（OD 值） ，與 CUTOFF 值相比較，從而判定標本中牛細小病毒（CPV）的存在與
否。
試劑盒組成 ：
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1/瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 6ml×1 瓶 12 密封袋 1 個
標本 要求 ：
1．標本處理：血清、血漿標本可直接檢測
2．標本按要求製備後儘早進行實驗。如不能及時檢測，可將標本在-20℃保存一個月，
但應避免反覆凍融。
3．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟 ：
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照（標準品）50μl。然後在待測
樣品孔先加樣品稀釋液 40μl，然後再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加於酶標板孔底部，
儘量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後棄去，如此
重複 5 次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A 50μl，再加入顯色劑 B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止
液後 15 分鐘以內進行。
結果判定 ：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.15
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為細小病毒（CPV）陰性
陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為細小病毒（CPV）陽性
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘後方可使用，酶標包被板開封後如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉汙染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須
注意安全。
保存 條件及有效期
1．試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6 個月