雙抗夾心法elisa原理
雙抗夾心法elisa原理雙抗體（原）夾心法，通常是結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與液體中的其他物質分開。加入酶標記的抗原或抗體，通過反應也結合在固相載體上。加入酶反應的底物後，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，根據呈色的深淺進行定性或定量分析。酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。
雙抗夾心法elisa操作步驟
標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然後在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然後從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻後從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋後各孔加樣量都為50μl，濃度分別為24μg/L ，16μg/L， 8μg/L，4μg/L， 2μg/L）。
elisa實驗操作步驟2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加於酶標板孔底部，儘量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行。
Sbjbio常見elisa試劑盒種類
生長因子檢測ELISA試劑盒
白介素檢測ELISA試劑盒
特種蛋白檢測ELISA試劑盒
酶檢測ELISA試劑盒
激素檢測ELISA試劑盒
活性多肽檢測ELISA試劑盒
腫瘤標誌物檢測ELISA試劑盒
植物檢測ELISA試劑盒
其他生物指標檢測ELISA試劑盒