小知識:雙抗體夾心法實驗原理及實驗步驟

　　四月，總是一個充滿魔力的時節。花都開的繽紛豔麗，恨不得把世界妝扮成粉紅色的新娘。枯樹竟也爆出新芽，綠的活力四射。今天上海恆遠小編帶您了解實驗中的小知識：雙抗體夾心法實驗原理及實驗步驟!希望您會喜歡!

　　雙抗體夾心法(常用於測定抗原)實驗原理：

　　用特異性抗體包被於固相載體，經洗滌後加入含有抗原之待測樣品，如待檢樣品中有相應抗原存在，即可與包被於固相載體上的特異性抗體結合，經保溫孵育洗滌後，即可加入酶標記特異性抗體，再經孵育洗滌後，加底物顯色進行測定，底物降解的量即為欲測抗原的量。

　　

　　雙抗體夾心法實驗步驟：

　　一、材料準備：

　　1. 實驗材料：血清、血漿、體液

　　2. 實驗儀器：酶標比色計、96 孔板、移液槍、離心管、離心管盒

　　3. 所需試劑及試劑盒：碳酸鹽包被緩衝液、抗體球蛋白、吐溫-20、檸檬酸、硫酸

　　二、實驗操作方法：

　　1. 包被抗體：用包被緩衝液稀釋特異性抗體球蛋白至最適濃度(1～10 μg /ml)，每凹孔加 0.3 ml，4℃ 過夜，或 37℃ 水浴 3 小時，貯存冰箱。

　　2. 洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩衝液(含 0.05% 吐溫-20)洗 3 次，每次 5 分鐘。

　　3. 每凹孔加入 0.2 ml 用稀釋緩衝液稀釋的含抗原的被檢標本，37℃ 作用 1～2 小時。

　　4. 洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩衝液(含 0.05% 吐溫-20)洗 3 次，每次 5 分鐘。

　　5. 加入 0.2 ml 用稀釋緩衝液稀釋的酶標記特異性抗體溶液，37℃ 作用 1～2 小時或由預試實驗確定作用時間。

　　6. 洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩衝液(含 0.05% 吐溫-20)洗 3 次，每次 5 分鐘。

　　7. 加入 0.2 ml 底物溶液於每個凹孔(OPD 或 OT)，室溫作用 30 分鐘(另作一空白對照，0.4 ml 底物加 0.1 ml 終止劑)。

　　8. 加終止劑：每凹孔加 2M H2SO4 或 2 M 檸檬酸 0.05 ml。

　　9. 觀察記錄結果：目測或用酶標比色計測定(OPD 用 492 nm)OD 值。

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