人OJ抗體/抗異亮氨醯tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)ELISA實驗原理

2020-11-27 中國教育裝備採購網

人OJ抗體/抗異亮氨醯tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)ELISA實驗原理

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人OJ抗體/抗異亮氨醯tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)ELISA實驗原理　　　本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用於測定人血清，血漿及相關液體樣本中OJ抗體/抗異亮氨醯tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)水平。實驗原理： 本試劑盒採用雙抗原夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中人OJ抗體/抗異亮氨醯tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)水平。用純化的人OJ抗體/抗異亮氨醯tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)抗原包被微孔板，製成固相抗原，可與樣品中OJ抗體/抗異亮氨醯tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)相結合，經洗滌除去未結合的抗體和其他成分後再與HRP標記的OJ抗體/抗異亮氨醯tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原複合物，經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人OJ抗體/抗異亮氨醯tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)的存在與否。試劑盒組成：試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 　保存說明書 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1個 1個 酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存陰性對照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存陽性對照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存酶標試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存濃縮洗滌液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存樣本處理及要求：1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱，應再次離心。2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘後，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反覆凍融，以使細胞破壞並放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。5. 組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘冷凍備用。6. 標本採集後儘早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於-20℃保存，但應避免反覆凍融.7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟：編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然後在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl。加樣將樣品加於酶標板孔底部，儘量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml後備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行。結果判定：　 試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10　 臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15　 陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為OJ抗體/抗異亮氨醯tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)陰性　 陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為OJ抗體/抗異亮氨醯tRNA合成酶抗體(OJ/IleRS)陽性注意事項1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。封板膜只限一次性使用，以避免交叉汙染。5．底物請避光保存。6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月

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