Caspase-3抗體(兔多抗)

2021-01-08 ChemicalBook

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背景[1-6]

Caspase-3抗體(兔多抗)用人工合成的人Caspase-3本身的切割位點處一段多肽，經適當修飾後免疫兔子，然後用protein A和抗原多肽親和柱經過兩步純化得到的高純度多克隆抗體。Caspase-3抗體可以識別全長的Caspase-3(35kD)，也可以識別Caspase-3被剪切後產生的17kD片段。未發現和其它Caspase家族蛋白有交叉反應。Caspase-3是細胞凋亡過程中最關鍵的執行分子(key executioner)之一，可以剪切細胞凋亡過程中的許多關鍵蛋白，例如PARP。

Caspase-3的激活需要從沒有活性的全長Caspase-3(35kD)，在Asp28和Ser29之間及Asp175和Ser176之間進行剪切，產生有活性的17kD肽段。Caspase-3的激活常被作為細胞凋亡的一個重要指標。細胞凋亡(apoptosis)是細胞為維持內環境穩定，更好地適應生存環境而主動形成的一種自我死亡過程，它涉及一系列基因的激活、表達及調控等作用。

大量的光鏡及超微結構的研究分析證明哺乳動物附植前的胚胎就可以觀察到細胞凋亡的發生，胚胎細胞的凋亡有利於胚胎去除發育異常的細胞，但研究結果發現細胞凋亡與胚胎發育的停滯相關，超出某一程度的凋亡不利於胚胎的發育。因此研究著床前胚胎細胞的凋亡將有助於正確理解胚胎的發育過程，改進體外培養體系，提高胚胎質量，解決哺乳動物胚胎流產率高的問題。

半胱天冬酶家族(Caspase)能夠啟動和維持細胞凋亡，而其成員Caspase-3是該細胞凋亡通路下遊最重要的凋亡蛋白酶，其表達量直接反映細胞凋亡程度。Caspase-3是位於哺乳動物細胞凋亡通路下遊關鍵的死亡蛋白酶。正常情況下，胞質中的Caspase-3以無活性的酶原形存在，細胞凋亡信號的出現可導致Caspase-3裂解、活化，活化的Caspase-3又進一步導致蛋白酶級聯切割放大，最終使細胞走向死亡。因此Caspase-3表達量可以直接反映細胞凋亡程度。細胞凋亡程度Caspase-3是細胞凋亡過程中最關鍵的執行分子(key executioner)之一，可以剪切細胞凋亡過程中的許多關鍵蛋白，例如PARP。

Caspase-3的激活需要從沒有活性的全長Caspase-3(35kD)，在Asp28和Ser29之間及Asp175和Ser176之間進行剪切，產生有活性的17kD肽段。Caspase-3抗體可以識別全長的Caspase-3(35kD)，也可以識別Caspase-3被剪切後產生的17kD片斷。未發現和其它Caspase家族蛋白有交叉反應。

應用[7][8]

Caspase-3抗體可用於製備AnnexinV-FITC細胞凋亡試劑盒。

所述試劑盒包括：0.6-0.8%BSA的PBS緩衝液，2.5-4%多聚甲醛的PBS緩衝液，含0.6-0.8%Triton-X-100和0.06-0.08%吐溫40的PBS緩衝液，兔抗caspase-3抗體，帶有Alexa-Fluor488綠色螢光素標記的山羊抗兔IgG二抗，18-22μM-DAPI的PBS緩衝液。所述兔抗caspase-3抗體是用合成的caspase-3蛋白中靠近Asp175的氨基末端殘基的多肽抗原免疫兔子獲得的多克隆抗體；兔抗caspase-3抗體按1:600的體積比稀釋於封閉液中。

所述山羊抗兔IgG二抗按1:600的體積比稀釋於封閉液中；其中，所述封閉液為含10%山羊血清和0.06-0.08%吐溫40的PBS液。上述試劑盒能對凋亡細胞進行準確定性和定量檢測，靈敏度高、特異性強，操作簡單，重複性好，效率高。在研究肌醇六磷酸(IP6)對人結腸癌細胞HT-29的誘導凋亡作用，檢測Caspase3基因在IP6處理細胞前後表達的變化，並對IP6誘導人結腸癌細胞HT-29的凋亡機制進行初步探討。

方法不同濃度的IP6以不同時間作用於體外培養的HT-29細胞，用MTT法檢測IP6持續作用對癌細胞增殖的影響；透射電鏡觀察癌細胞超微結構的變化；用RT-PCR方法對IP6作用前後以及作用不同濃度和時間的癌細胞內Caspase3活性進行檢測。結果IP6能顯著抑制人結腸癌細胞HT-29生長，呈劑量與時間依賴性；IP6作用後，HT-29細胞出現凋亡的形態學改變；與對照組相比，不同濃度的IP6作用不同時間後，Caspase3 mRNA表達均升高(F=8.173~91.755,q=3.960~17.095,P<0.05),IP6作用6個月組Caspase3 mRNA表達升高較其他時間組顯著(q=12.858~14.890,P<0.01)。

參考文獻

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