Caspase-3 檢測 7 大要點：
1. 合理的凋亡誘導處理方式：設置藥物誘導時間和濃度梯度預實驗，以確定特定細胞系中藥物誘導 caspase-3 活化的最佳條件。
前體形式的 caspase-3 由一個前端功能區（prodomain）和一大一小兩個催化亞單位構成。在特定的刺激比如配體受體互作、生長因子匱乏和細胞功能抑制劑等的作用下，未活化的酶原形式的 caspase-3 在 Asp-28/Ser-29（N 端功能前區）以及 Asp-175/Ser-176（大小亞基之間）被剪切活化，轉變為活化的 p17 大亞基和 p12 小亞基片段。p17 和 p12 會二聚化，從而形成最終活化形式的 cleaved caspase-3（5，6）。
圖一 Caspase-3 活化示意圖（圖片源自文獻 Zhiyong Han et al. (1997) J. Biol. Chem. 272, 13432–13436）
凋亡過程中最重要的事件之一即是 caspase-3 的活化，因此 cleaved caspase-3 的檢測是凋亡研究中的常用手段。檢測不到 cleaved caspase-3，最主要的原因還是樣本中沒有足夠比例的凋亡細胞。
2. 貼壁細胞發生凋亡後會變得難貼壁，需離心收集所有的懸浮細胞。
3. 裂解樣本過程中超聲。超聲條件：在 35%-40% 的功率輸出條件下破碎 3 次，每次 10 秒，各次之間間隔 10 秒，冰上操作。沒有探頭超聲儀，也可用細的注射器針頭反覆吹打來破碎。
4. 足夠的蛋白上樣量：組織每孔 100ug，誘導的細胞每孔 20-30ug。
5. 跑膠條件：16% 或 4-20% Tris-Glycine 膠檢測 cleaved caspase-3。
6. 轉膜條件：0.2um 孔徑膜，溼轉，70V（200-250mA）不超過 1.5 小時。轉膜液 25mM Tris，192mM Glycine，和 20% methanol。0.2um 的孔徑能最大程度的減少轉膜過程中小分子量蛋白的丟失。
7. 表現優異的抗體。做 WB 檢測時，用既能識別全長 caspase-3（也就是非活性的 procaspase）又能識別剪切、活化 caspase-3 的抗體是更加明智的選擇。