人二氫嘧啶脫氫酶(DPD)ELISA檢測試劑盒使用說明書

2020-11-25 中國教育裝備採購網

本試劑盒只能用於科學研究，不得用於醫學診斷
人(Human)二氫嘧啶脫氫酶(DPD)ELISA檢測試劑盒使用說明書
檢測原理
試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預
先包被二氫嘧啶脫氫酶(DPD)抗體的包被微孔中，依次加入標本、
標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯
色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成
最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的二氫嘧啶脫氫酶(DPD)呈正相
關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞
刺激，收集血液後，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地
分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘
取上清。
5. 保存：如果樣本收集後不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存於
-20℃，避免反覆凍融，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恆溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會有結晶，這屬於正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解
後再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封(低溫乾燥)保存。
3. 濃度為0 的S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5 倍，最終結果乘以5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱96孔配置48孔配置備註
微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無
標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無
樣本稀釋液6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩衝液25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個1 個無
註：標準品(S0-S5)濃度依次為：0、7.5、15、30、60、120 ng/mL
試劑的準備
20×洗滌緩衝液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋，即1 份的20×洗滌緩
衝液加19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min 後甩盡
孔內液體，在吸水紙上拍幹，如此洗板5 次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min 後的鋁箔袋中取出所需板條，剩餘板條用自封
袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 待測樣本孔先加樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋
5 倍)；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴
鍋或恆溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去
洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板5 次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL，15min 內在450nm 波長處測定各孔的OD
值。
結果判斷
繪製標準曲線：在Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應
OD 值作縱坐標，繪製出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣
本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關係數R 值，大於等於
0.9900。
2. 靈敏度：最低檢測濃度小於1.0 ng/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重複性：板內、板間變異係數均小於15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6 個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用於臨床實驗或人體實驗，否則所
產生的一切後果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，後果由實驗者
承擔。

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