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本試劑盒只能用於科學研究，不得用於醫學診斷。
魚類胰島素生長因子-1(IGF-1)定量檢測試劑盒(ELISA)
使用說明書
【試劑盒名稱】
魚類胰島素生長因子-1(IGF-1)定量檢測試劑盒(ELISA)
【試劑盒用途】
定量檢測魚血清、血漿及相關液體樣本中類胰島素生長因子-1(IGF-1)的含量。
【檢測原理】
本試劑盒採用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被魚類胰島素生長因子-1(IGF-1)單克隆抗體透明酶標包被板中，溫育足夠時間後，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間後，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中魚類胰島素生長因子-1(IGF-1)濃度呈正相關，450nm波長下測定OD值，根據標準品和樣品的OD值，計算樣本中魚類胰島素生長因子-1(IGF-1)含量。
【試劑盒組成】
| 1 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 7 | 顯色劑A液 | 6mL |
| 2 | 標準品 | 0.3mL×6管 | 8 | 顯色劑B液 | 6mL |
| 3 | 20倍濃縮洗滌液 | 25mL | 9 | 終止液 | 6mL |
| 4 | 樣本稀釋液 | 6mL | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 特殊稀釋液 | 6mL | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 酶標試劑 | 6mL | 12 | 密封袋 | 1個 |
備註：標準品(1號→6號)濃度依次為：24、12、6、3、1.5、0.75 μg/L.
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恆溫箱
2、標準規格酶標儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5、一次性試管
6、吸水紙
【操作步驟】
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定於框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍)；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恆溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：37℃水浴鍋或恆溫箱溫育30min。
8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s)，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。
11、測定：以空白孔調零，在終止後15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟體來計算。最終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3)，因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2、標本採集後儘早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應儘快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放於-20℃保存，但應避免反覆凍融。
3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。
【注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
2、酶標包被板開封後如未用完，應立即裝入密封袋中加乾燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量範圍為0.75-24μg/L，超過此範圍，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋後測定準確結果(0.75-24μg/L範圍內)，乘以總稀釋倍數即為樣本最終濃度。
6、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。
7、為避免交叉汙染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重複使用封板膜。
8、試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用。
9、底物B對光敏感，避免長時間暴露於光下。
【操作程序總結】
準備試劑，樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鐘
洗板4次，加入酶標試劑，37℃反應30分鐘
洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內讀OD值
計算
【檢測範圍】
0.75μg/L - 24μg/L
【規格】
96人份/盒
【貯藏】
2-8℃，避光防潮保存。
【有效期】
6個月