大鼠核因子kb(NFkb)ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：大鼠核因子kb (NFkb)酶聯免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用於測定大鼠血清、血漿、或相關組織液中核因子kb (NFkb)的含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠核因子kb 水平。用純化的大鼠核因子kb抗體包被微孔板，製成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入核因子kb，再與HRP標記的核因子kb抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物，經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核因子kb呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠核因子kb (NFkb)的含量。
試劑盒組成
| 1 | 20倍濃縮洗滌液 | 30ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品（1350ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本處理及要求
1．血清、血漿標本可直接測定；
2．尿液、腦脊液、腹腔液：2000-3000轉/分離心10分鐘後，取上清液待測。
3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
4．採集後儘早進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放於-20℃保存，但應避免反覆凍融。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上按序設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然後在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；再各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻後，在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉；再各取50μl分別加到第五、第六孔中；再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻後從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉。（ 稀釋後各孔加樣量都為50μl，濃 度分別為 900 ng/L，600ng/L ，300 ng/L，150 ng/L，75 ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加於酶標板孔底部，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用，酶標包被板開封後如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於標準品孔第一孔OD值的），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請最後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 嚴格按說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
6．本試劑不同批號組分不得混用。
7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉汙染。
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．底物請避光保存。
檢測範圍：
50 ng/L -1000 ng/L
規格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
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