大鼠羥脯氨酸(Hyp)Elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍： 96T
0-40μg/L
使用目的：
本試劑盒用於測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中羥脯氨酸(Hyp)含量。
實驗原理
大鼠羥脯氨酸(Hyp)Elisa試劑盒說明書
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠羥脯氨酸(Hyp)水平。用純化的大鼠羥脯氨
酸(Hyp)抗體包被微孔板，製成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入羥脯氨酸(Hyp)，再
與HRP 標記的羥脯氨酸(Hyp)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物，經過徹底洗滌後
加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃
色。顏色的深淺和樣品中的羥脯氨酸(Hyp)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度
（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠羥脯氨酸(Hyp)濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（80μg/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1．標本採集後儘早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應儘快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放於-20℃保存，但應避免反覆凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
40μg/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
20μg/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
10μg/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
5μg/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2.5μg/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加於酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒後棄去，如此
重複5 次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液後15 分鐘以內進行。
操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘後方可使用，酶標包被板開封後如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好
控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大於標準品孔第一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計
算時請最後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉汙染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月大鼠羥脯氨酸(Hyp)Elisa試劑盒說明書
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