植物蔗糖(sucrose)Elisa試劑盒說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測範圍: 96T6ng/L -220ng/L使用目的:本試劑盒用於測定植物組織,細胞及其它相關樣本中蔗糖(sucrose)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物蔗糖(sucrose)水平。用純化的植物蔗糖(sucrose)抗體包被微孔板,製成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入蔗糖(sucrose),再與HRP 標記的蔗糖(sucrose)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物,經過徹底洗滌後加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的蔗糖(sucrose)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中植物蔗糖(sucrose)濃度。試劑盒組成1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(400ng/L) 0.5ml×1 瓶3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個標本要求1.標本採集後儘早進行提取,提取按相關文獻進行,提取後應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於-20℃保存,但應避免反覆凍融2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。200ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液100ng/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液50ng/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液25ng/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液12.5ng/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加於酶標板孔底部,儘量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3. 溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30 分鐘。4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋後備用5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒後棄去,如此重複5 次,拍幹。6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7. 溫育:操作同3。8. 洗滌:操作同5。9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液後15 分鐘以內進行。操作程序總結:計算以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘後方可使用,酶標包被板開封後如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3.各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大於標準品孔第一孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)後再測定,計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉汙染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 個月
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