人β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA試劑盒使用說明書

2020-11-27 中國教育裝備採購網

本試劑盒只能用於科學研究，不得用於醫學診斷
人(Human)β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA檢測試劑盒使用說明書
檢測原理
試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預
先包被β2微球蛋白(BMG/β2-MG)抗體的包被微孔中，依次加入
標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育並徹底洗滌。用底物
TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下
轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的β2微球蛋白(BMG/β
2-MG)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，
計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞
刺激，收集血液後，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地
分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘
取上清。
5. 保存：如果樣本收集後不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存於
-20℃，避免反覆凍融，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恆溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會有結晶，這屬於正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解
後再使用。2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封(低溫乾燥)保存。
3. 濃度為0 的S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明
書操作時樣本已經稀釋5 倍，最終結果乘以5 才是樣本實際濃度。
嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
4. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱96孔配置48孔配置備註
微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無
標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無
樣本稀釋液6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩衝液25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個1 個無
註：標準品(S0-S5)濃度依次為：0、25、50、100、200、400 ng/mL
試劑的準備
20×洗滌緩衝液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋，即1 份的20×洗滌緩
衝液加19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min 後甩盡
孔內液體，在吸水紙上拍幹，如此洗板5 次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min 後的鋁箔袋中取出所需板條，剩餘板條用自封
袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不
加。
4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴
鍋或恆溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍幹，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍幹，如此重複洗板5 次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min 內，在450nm 波長處測定各孔的
OD 值。
結果判斷
繪製標準曲線：在Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應
OD 值作縱坐標，繪製出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣
本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關係數R 值，大於等於
0.9900。
2. 靈敏度：最低檢測濃度小於1.0 ng/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重複性：板內、板間變異係數均小於15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6 個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用於臨床實驗或人體實驗，否則所
產生的一切後果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，後果由實驗者
承擔。

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